第一部分：高通量组织芯片制作及其免疫组化结果可靠性研究 目的:介绍高通量组织芯片制作经验，并验证免疫组化结果的可靠性。 方法:制作包含600位点，173例肝脏疾病的组织芯片，每个进行PCNA、MDR和HBsAg免疫组化染色。从中随机选取了50例，在其相对应的常规切片上进行同样的免疫染色，对比两者的差异。 结果:成功建立高通量组织芯片，每张芯片包含600个位点，密度达到100芯/cm2，位点丢失率在3％以内；组织芯片和常规切片中PCNA、MDR和HasAg表达的一致率分别为92％、92％和98％，Kappa系数分别为0.83，0.83和0.95。 结论: 我们成功制作了较高质量的高通量组织芯片，并可进行有效、可靠的免疫组化检测。 第二部分：基于组织芯片的肝癌中多量血管新生蛋白表达研究 目的: 肿瘤血管新生是肿瘤发生发展过程中极为重要的环节，多量生物因子参与了这一环节的调控。本研究探讨多种血管新生相关因子在HCC中的表达，并分析它们与MVD、肝癌患者临床病理特征和预后的关系。 方法: 构建了包含98例HCC和44例非肿瘤肝疾病的组织芯片。通过免疫组化方法 检测VEGF、HIF-1α、FLK-1、Angiopoient-2、Tie-2、TGF—β、CD105、bFGF、COX-2、 MMP—9、iNOS、MCP-1、endostatin、TIMP-1、TIMP-2、TSP-1以及P53在肝癌、癌旁和非肿瘤肝疾病组织中的表达情况，CD34抗体标记血管内皮细胞检测微血管密度(MVD)，判断这些因子的表达与MVD、肿瘤的临床病理特征的关系，及对患者预后的影响。 结果:VEGF、HIF-1α、CD105、Flk-1、Angiopoientin-2、Tie-2、MMP—9、TGF—β、bFGF、COX-2、iNOS、TIMP-2和TSP-1在肝癌中表达率高于非肿瘤肝疾病组织。VEGF、FLK、Ang-2、Tie-2、MMP—9、bFGF、TGFβ、MCP-1、P53、endostatin、TIMP-2、TSP等在癌旁组织中表达较肿瘤组织显著增强。HCC的MVD值与VEGF(r=0.27，p=0.01)、MCP-1(r=0.23，p=0.01)、bFGF(r=0.32，p=0.00)、iNOS(r=0.21，p=0.04)、endostatin(r=0.24，p=0.02)成正相关。iNOS和TSP-1阳性患者预后较好。 结论:组织芯片技术适用于多因子大样本的研究；除促进因子外，抑制因子在HCC血管新生过程中表达较在非肿瘤肝疾病中增强；而癌旁组织中相关因子的高表达可能与肝炎肝硬化有关。在研究的17种因子中，TSP-1和iNOS可能是与HCC病人预后相关的指标。 第三部分：大鼠门静脉三维重建的初步研究 目的:制作大鼠门静脉灌注标本，获取每一层面血管铸型数据，计算机辅助重建门静脉数字模型。 方法:选用丙烯颜料为主要成分的填充剂，注入大鼠活体门静脉系统内(20例)，得到大鼠门静脉灌注标本。OCT包埋标本，冰冻切片，每一切面进行拍照，获取血管的层片图像数据。导入软件中进行图像分割与三维重建。 结果:该方法能成功地制作出大鼠肝脏血管铸型标本，填充剂可灌注到直径50～100um的终末小血管。图层间距50um，每一标本可获取约200～300张层片。 结论:此方法是为计算机重建大鼠肝血管树数字模型的一种可行方法