【摘 要】
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黄曲霉毒素B_1(AFB_1)被广泛认为是I类致癌物质。如何将其从食品中去除成为一个重要的研究课题。由于物理或化学方法都有缺点,生物解毒已成为一种趋势。本研究从土壤中分离出一株高活性AFB_1降解菌,通过16S rDNA序列对比分析及生理生化实验鉴定其种属;同时对其生长条件进行优化;分析并纯化其主要降解活性物质;研究影响活性物质降解效率的主要因素;并对菌液及酶液实际作用的安全性和有效性进行评估,为
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黄曲霉毒素B1(AFB1)被广泛认为是I类致癌物质。如何将其从食品中去除成为一个重要的研究课题。由于物理或化学方法都有缺点,生物解毒已成为一种趋势。本研究从土壤中分离出一株高活性AFB1降解菌,通过16S rDNA序列对比分析及生理生化实验鉴定其种属;同时对其生长条件进行优化;分析并纯化其主要降解活性物质;研究影响活性物质降解效率的主要因素;并对菌液及酶液实际作用的安全性和有效性进行评估,为其在实际的生产应用中提供依据。具体实验结果如下:1)采用新型香豆素-无水乙醇培养基,通过逐步提高培养基中香豆素浓度,从土壤分离出一株高活性AFB1降解菌A6。通过16S rDNA序列对比分析及生理生化鉴定结果,鉴定该菌为铜绿假单胞菌。2)以装液量、温度、初始pH、接种量的单因素实验结果为依据,通过正交试验对细菌生长条件进行优化。优化生长培养条件为:发酵温度37?C,初始pH7.0,接种量为8%,装液量30 mL/100 mL。较优化前,AFB1降解率得到了显著提高,菌液与AFB1于37?C共作用72 h后,AFB1降解率为85.69%。3)A6降解AFB1的主要活性成分为一种分子量为20 kD的热稳定胞外酶,提取流程为:65%饱和度硫酸铵沉淀、30 kD、10 kD、3 kD超滤管依次梯度超滤、使用葡聚糖G-50进行凝胶层析,可将蛋白质的比活力纯化71倍。4)优化酶液的反应条件为:降解时间>120 h,AFB1降解率上升至90.47%;pH值为7.0时降解率最高,在pH值为5.0?8.0范围内,均有降解能力;底物浓度范围为100μg/L?1000μg/L;温度范围为37?C?70?C,能保持71%的降解率;Zn2+、Mg2+和Fe3+是主要酶活抑制剂。5)与AFB1标准品(86.91%)相比,72 h后AFB1降解产物对HUVEC细胞抑制率下降至28.79%,同时,酶液对HUVEC细胞抑制率为15.58%,对细胞的毒性影响较小。6)A6发酵菌液及酶液未有明显的对黄曲霉菌株的生长抑制作用。7)酶液和菌液在食品基质中也能发挥较高的降解能力,酶液在固体花生基质中孵育5 d后能降解90.48%的AFB1,同时,菌液固态发酵的最佳料水比为1:1.5,孵育5 d后能降解55.34%的AFB1。
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