目的：　　1.研究活性化合物对肿瘤细胞凋亡的影响，探讨其在凋亡通路中对凋亡蛋白表达的影响。　　2.研究活性化合物对人非小细胞肺癌H1975内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）中的关键蛋白CHOP表达的影响。　　3.研究活性化合物WZ35在裸鼠体内的抗肿瘤疗效，研究其对蛋白Caspase-3表达的影响，从体内水平探讨WZ35抗肿瘤作用。　　方法：　　1. MTT法检测WZ35，吉非替尼，埃罗替尼对H1975细胞的增殖抑制作用，并计算各自的IC50。　　2.通过DAPI染色法检测WZ35诱导H1975细胞凋亡的作用。　　3.通过FCM检测法检测WZ35诱导H1975细胞凋亡和ROS产生的情况。　　4. Western blot法检测 H1975细胞在活性化合物的作用下PARP,Bcl-2,Bax,caspase-3蛋白的表达情况。H1975细胞基因沉默CHOP后， Western blot检测其在WZ35作用下CHOP蛋白的表达,FCM检测在WZ35作用下H1975细胞凋亡的情况。　　5． FCM法检测WZ35对H1975细胞周期作用的影响。Western blot法检测细胞株H1975在化合物WZ35作用后细胞周期蛋白Cdc2,MDM2,CyclinB1的表达。　　6.电镜法观察WZ35对H1975细胞内质网的影响。Western blot法检测WZ35对H1975细胞内质网应激相关蛋白表达的影响。　　7.免疫荧光观察WZ35对H1975细胞内CHOP蛋白表达的影响。　　8.免疫荧光观察WZ35对H1975线粒体膜电位的影响。Western blot检测细胞色素C在WZ35作用下的释放情况。　　9．根据体内实验研究制裸鼠肿瘤模型，得到肿瘤组织，秤瘤重，测瘤体积，免疫组化法检测Ki67蛋白的表达。Western Blot法检测肿瘤组织中Caspase-3蛋白的表达。　　结果：　　1．MTT结果显示WZ35对H1975的生物活性明显强于吉非替尼和埃罗替尼，WZ35的IC50为1.17μM,而吉非替尼和埃罗替尼的IC50均大于20μM。　　2．DAPI染色结果显示，与阴性对照组DMSO和阳性对照组姜黄素相比，WZ35可明显剂量依赖性得诱导H1975细胞的凋亡。　　3．FCM凋亡实验结果表明，与阴性对照组DMSO和阳性对照组姜黄素相比，WZ35可明显剂量依赖性诱导H1975细胞凋亡。此结果暗示WZ35的抗H1975肿瘤活性部分或全部是通过促凋亡途径进行的。　　4．FCM周期实验结果表明，与阴性对照组DMSO和阳性对照组姜黄素相比，WZ35可明显剂量依赖性的将H1975细胞周期阻滞在G2/M期。Western blot结果表明WZ35可以剂量依赖性的抑制细胞周期蛋白Cdc2,MDM2,CyclinB1的表达。　　5．FCM ROS实验结果表明，与阴性对照组DMSO相比，WZ35可明显剂量依赖性得促进H1975中活性氧的产生。加入N-乙酰半胱氨酸后，WZ35促进ROS产生的作用被阻断。　　6．电镜实验结果表明，与阴性对照组DMSO和阳性对照组姜黄素相比，H1975细胞在WZ35作用下，内质网明显发生肿胀。提前孵育NAC后，WZ35促内质网损伤的作用明显被阻断。此实验结果表明WZ35的促肿瘤凋亡作用可能与促进内质网损伤有关。　　7．Western blot结果显示，在WZ35作用下，CHOP,ATF-4,P-eIF2α,P-PERK的表达增强，并呈现浓度依赖性；流式凋亡的结果表明，当用siRNA沉默CHOP后， WZ35的促凋亡作用大部分被阻滞；免疫荧光结果同样显示WZ35能够促进H1975细胞CHOP的表达，表明其诱导细胞凋亡的途径与内质网应激有关。　　8．免疫荧光结果表明，WZ35能够明显降低H1975细胞膜电位，并且能促进细胞色素C的释放。　　9．体内抗肿瘤实验表明，与阴性对照组和阳性对照组相比，WZ35组的肿瘤体积明显较小。对肿瘤组织进行免疫组化切片得出WZ35给药组Ki67蛋白的表达明显降低。对肿瘤组织进行Western blot检测得出WZ35给药组caspase-3蛋白的表达显著升高。　　结论：　　WZ35能够有效促进H1975肿瘤细胞的凋亡，其促凋亡作用一部分是通过抑制肿瘤细胞的周期来发挥，一部分是通过激活肿瘤细胞中ROS来引起内质网应激进而诱导H1975细胞的凋亡。实验结果表明，WZ35可能是对抗对吉非替尼和埃罗替尼耐药的H1975肿瘤的有效策略。