乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,死亡率居大城市女性恶性肿瘤第三位。乳腺癌的发生发展与多种因素有关,例如家族遗传、激素因素、外界环境因素等。而已知的这些致癌因素只能解释约20–50%的病例,这启发我们去寻找新的乳腺癌致癌因素。最近,关于病毒等微生物感染导致乳腺癌的话题,受到广泛关注。例如:EB病毒,鼠乳腺癌病毒(MMTV)、人乳头状瘤病毒(HPV)等均发现与乳腺癌有关。其中,HPV与乳腺癌的关系更成为研究的热点。HPV与其他肿瘤(宫颈癌、肛门生殖器癌、皮肤癌)的关系已经得到深入研究,人们发现:约99.7%的宫颈及子宫癌变中能够检测到HPV的存在,同时,HPV疫苗已经在欧美地区用于预防宫颈癌变的发生,而HPV与乳腺癌的关系至今未能得到明确结论。回顾国内外文献,我们发现在这一研究领域仍然有许多问题尚待解决:首先,HPV与宫颈癌的关系已经得到证实,那么,同样是女性高发的乳腺癌是否也与HPV感染相关呢?其次,HPV的传播方式主要以性接触为主,乳腺的开放导管是否也存在被感染的机会?再次,此方面研究在世界范围内尚处于探索阶段,且争议较大,我们也许有机会作出自己的贡献。所以,我们设计以下实验,选取HPV病毒作为我课题组系统检测乳腺癌相关病毒的先期探索。结合我科临床优势,我课题组筛选出60例乳腺癌患者,60例乳腺良性肿瘤患者(其中30例乳腺纤维腺瘤,20例乳腺导管内乳头状瘤,10例乳腺腺病),取肿瘤组织学标本,在无菌新鲜状态下送检,应用灵敏度及特异度均较高的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法进行检测,再应用原位杂交,透射电镜等同时检测,对实验结果进行验证。本文的具体工作及结果如下:1根据我国西北地区HPV流行病学特点,选择HPV16、18型作为检测目标,应用实时荧光定量PCR方法,对60例乳腺癌患者,60例乳腺良性肿瘤患者(其中30例乳腺纤维腺瘤,20例乳腺导管内乳头状瘤,10例乳腺腺病)取新鲜组织学标本进行检测,参考国内外文献,设计检出率较高的HPV16、18型E6、E7区探针,并选择HPV16、18全长质粒及已知HPV阳性的宫颈癌组织标本作为阳性对照。结果表明:应用实时荧光定量PCR在乳腺癌组织中未能检测到16、18型HPV病毒。2肿瘤组织DNA经PCR定向扩增后,将扩增产物应用琼脂糖凝胶电泳,同时选择HPV16、18全长质粒及已知HPV阳性的宫颈癌DNA扩增产物作为阳性对照。结果表明:应用琼脂糖凝胶电泳方法在乳腺癌组织PCR扩增产物中,未发现与HPV16、18型病毒相同分子量的电泳条带。3取肿瘤组织切片进行原为杂交检测,杂交探针设计为HPV16、18型,选择已知HPV阳性的宫颈癌组织标本作为阳性对照,并应用显微镜进行观察,结果表明:应用原位杂交方法在乳腺癌组织细胞核内未能发现阳性染色的棕褐色颗粒。4取部分肿瘤组织标本送基础部电镜中心进行电镜样本制备及透射电镜观察,结果表明:透射电镜下没有观测到病毒样物质,只观察到致密颗粒,颗粒的性质有待进一步研究证实。除此之外,我课题组筛选及保存大量标本资料,建立了保存完整、取材全面、资料完善、随访完备的乳腺癌标本库,随时取材调用,为进一步研究打下坚实基础。HPV病毒作为先期检测的乳腺癌相关病毒,在检测方法上为下一步检测乳腺癌中其它可能存在病毒提供有益的借鉴。同时也增加了我们对于病毒特性的了解。实验期间,和西安交通大学第二附属医院检验科,西京医院临床检验科,第四军医大学基础部电镜实验中心合作,并得到德国癌症研究中心Dr.zurHausen教授的帮助及指导,搭建了与国内外同行沟通、交流、合作的平台。