CFDA-SE标记的兔视网膜色素上皮细胞移植研究

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目的:验证羧基荧光素乙酰乙酸[CFDA-SE]标记移植的兔视网膜色素上皮细胞进行体内外观察的可行性,并追踪移植细胞在体内的生物行为,同时探索一种简便有效的视网膜色素上皮细胞移植方法。 方法:用CFDA-SE(10 μ mol/L)标汜供体RPECs,37℃下孵育1min,用自制的29G微量注射器将细胞悬液直接注入到受体的视网膜下腔,注入量为20 μ L。术后用SLO、OCT等追踪观察。分别在14天,30天,60天,90天,120天,150天,180天时处死实验兔,荧光显微镜下观察标记的供体细胞,同时作紧密连接的结构蛋白Z0-1的免疫荧光分析。 结果: (1)SLO结果显示CFDA-SE标记的RPECs在活体内可成功追踪到六个月:术后第一天,用512nm激发光可见视盘下方有一泡状隆起,在488nm的激发光下,可见移植区团块状的高荧光区;二周后可见泡状隆起消失,高荧光区面积扩大,至六个月时,下方视网膜可见均匀的点状荧光区,荧光强度较早期减弱。 (2) OCT结果显示移植术后二周可见受体的RPE层与神经视网膜之间的供体RPECs表现为团块状沉积物,此后逐渐向周边移行,铺成单层。 (3)荧光显微镜下可见移植的RPECs可以在术后二周至6个月冰冻切片中被持续观察到。在波长为488nm的蓝色激发光下,CFDA-SE标记的RPECs呈现绿色荧光。移植中央部,细胞多形成2-3层,在远离移植部位的细胞部分可嵌入到宿主的RPE层。移植术后2个月后,在供体RPECs处经过免疫荧光标记到的Z0-1蛋白可呈红色点线状。 结论: (1) CFDA-SE 是稳定的细胞标记物,用10 μ mol/L标记的RPECs在兔体内外可成功追踪6个月; (2) RPE细胞悬液植入兔视网膜下腔后,部分细胞可恢复极性,逐渐铺成单层并嵌插到宿主的RPECs中,供体的RPECs与宿主的RPECs可形成紧密连接,行使其屏障功能; (3) 经过改进的内路法是一种简便可靠的RPECs移植方法。
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