艾地普林(Aditoprim,ADP)是一种新型的二氢叶酸还原酶抑制剂,因为抑菌效果良好,半衰期长,表观分布容积大,且低毒安全,无致突变性,所以它在临床兽医学上具有很大的潜力和研究价值。目前国内外关于艾地普林的各项研究已有不少,但缺乏关于其微生物学安全性评价的试验研究,为了更加系统全面地评估艾地普林,有必要进行艾地普林微生物学每日允许限量(ADI)研究,制定出合理的微生物学ADI值。本课题利用体外恒化器模型研究艾地普林对人肠道菌群的影响。通过往模型中添加不同浓度的艾地普林,测定不同浓度药物作用下菌群定植屏障功能和耐药性的变化。通过监测五种优势菌(大肠杆菌、肠球菌、脆弱拟杆菌、产气荚膜梭菌和双歧杆菌)数量变化、代谢产物脂肪酸(乙酸、丙酸、正丁酸、异丁酸、正戊酸、异戊酸、己酸、庚酸)的变化和致病菌鼠伤寒沙门氏菌的定植情况来评价肠道菌群定植屏障功能变化。最终通过定植屏障功能的破坏和肠道细菌耐药率的变化,确定最大无明显副作用浓度(NOAEC),从而建立艾地普林微生物学ADI值。1 艾地普林对肠道菌群定植屏障功能的影响通过前期预实验确定恒化器模型中艾地普林最终的四个给药浓度分别为0、1、16、128μg/m L。低浓度组(1μg/m L)中,五种优势菌数量和代谢产物脂肪酸浓度的变化均在95%置信区间之内,鼠伤寒沙门氏菌最终浓度降到10~2CFU/m L以下,艾地普林对肠道菌群的定植屏障功能没有产生显著性影响。中浓度组(16μg/m L)中,大肠杆菌数量从第18 d开始出现大幅度降低,至第22 d时数量比95%置信下限降低了86.61%,肠球菌和产气荚膜梭菌数量围绕置信下限波动,最小值分别为4.925×10~4CFU/m L和9.016×10~5CFU/m L,仅为置信下限的17/37和30/67,其他菌群变化均在正常范围之内。乙酸、丙酸、正丁酸、异戊酸除极个别时间点略低于置信下限外,其他时间点数据均在95%置信区间之内,正戊酸从第20 d开始低于置信下限,最低时浓度为3.970 mmol/m L,比置信下限降低了19.73%,异丁酸有4 d浓度低于置信下限,第21 d时浓度最低,比置信下限降低了21.82%,己酸最低浓度比置信下限降低了约15%,庚酸波动幅度明显增加,浓度最高日差为0.405 mmol/L,是置信区间的1.49倍,鼠伤寒沙门氏菌最终浓度为3.09×10~3CFU/m L,未降到10~2CFU/m L以下,说明中浓度组肠道菌群的定植屏障功能遭到了一定程度地破坏。高浓度组(128μg/m L)中大肠杆菌、双歧杆菌、脆弱拟杆菌、产气荚膜梭菌数量最低值较置信下限分别降低了94.56%、89.58%、82.11%、91.75%,肠球菌数量不降反增,第22 d时数量为置信上限的3.96倍,乙酸、丙酸、丁酸、正戊酸、异戊酸、异丁酸浓度比置信下限分别降低了21.68%、22.55%、11.06%、27.85%、23.45%、17.91%,己酸和庚酸浓度的最高日差分别为置信区间的1.62倍和1.61倍,鼠伤寒沙门氏菌数量稳定在10~5CFU/m L以上,说明肠道菌群定植屏障功能被破坏。2 艾地普林对肠道菌群耐药率的影响低浓度组(1μg/m L)中五种优势菌耐药率均在置信区间之内,与对照组相比,耐药率未发生显著性变化;中浓度组(16μg/m L)大肠杆菌和肠球菌耐药率分别从第18 d和第17 d开始超出置信上限,最高时耐药率分别为13.4%和48.94%,双歧杆菌耐药率波动起伏较大,最小值和最大值相差13.31%,产气荚膜梭菌最高时耐药率达到15.71%,为置信上限的1.58倍,脆弱拟杆菌耐药率除极个别值超出置信范围外,其他均在置信区间内;高浓度组(128μg/m L)艾地普林对五种优势菌耐药率变化产生了显著性影响,大肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌、脆弱拟杆菌、产气荚膜梭菌的耐药率分别为置信上限的2.65倍、1.68倍、1.5倍、1.78倍、1.63倍。低浓度组艾地普林未显著性改变人肠道菌群的定植屏障功能和耐药率,因此艾地普林对人肠道菌群的NOAEC值为1μg/m L,根据ADI计算公式得出,艾地普林对人肠道菌群的微生物学ADI为91.67μg/kg b.w./day。