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研究背景视网膜母细胞瘤(retinoblastoma, RB)是婴幼儿最常见的眼科肿瘤,约占儿童恶性肿瘤的4%,也是一类严重的致死性肿瘤(占婴幼儿死亡率的第一位)。大部分RB患儿在5岁之前发病。开始发病时较常见的症状为白瞳症、斜视及视力下降,多因此就诊。病情进一步发展则相继出现青光眼、葡萄膜炎、玻璃体出血,甚至肿瘤转移、死亡等。RB具有明显的家系遗传性,大多数呈常染色体显性遗传方式,外显率高达90%。位于13q14.1-q14.2上的RB1基因(OMIM:180200)已被确定为唯一的RB致病基因。RB1基因全长183 kb,包含27个外显子,属于较长的基因。RB1基因是人类发现的第一个抑癌基因,其编码的pRB蛋白广泛存在于各种细胞中。正常的RB1基因表达对抑制RB的发生是必不可少的,RB1基因的缺失或变异失活都会导致RB的发生。RB在临床上可表现为单眼发病和双眼发病两种类型。双眼患者发病时间早,多在1岁以内,90%以上的病例都是遗传性的；单眼患者发病较晚,约15%为遗传性的。92.7%的双眼患者和14.6%的单眼患者均携带高外显的RB1种系基因突变。因此,RB家系患者和散发患者的RB1基因的变异组学研究,对其早期诊断、治疗、预后、遗传咨询、产前诊断、植入前遗传学诊断以及基因治疗等都至关重要。研究目的对1个浙江地区视网膜母细胞瘤家系中所有成员的外周血表达的RBI cDNA序列进行测序分析,以期快速获得基因组水平RB1基因的突变信息,探讨RB1基因突变与RB发病的相关性。研究对象一个居于浙江省杭州地区的RB家系(包含2例患者),以及10例正常健康对照。研究方法(1)抽取所研究家系的所有成员和正常对照个体的外周血(抗凝),用Ambion RiboPure blood kit提纯外周血总RNA,用苯酚-氯仿法纯化基因组DNA；(2)取所有RNA样本,反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增其RBI cDNA全序列并测序；(3)取所有DNA样本,PCR扩增RB1基因外显子并测序；(4) DNAssist软件及Chromas 2软件进行测序数据分析,并与Ensemb1、NCBI等人类遗传学权威数据库进行比对分析；(5)针对所发现的突变位点,利用碱基错配引物的等位基因特异性-聚合酶链式反应(AS-PCR法),验证所发现的突变,并且筛查家系中的嵌合体患者。研究结果(1)所研究RB家系的2例RB患者(先证者：双眼；先证者之父：单眼)的外周血RB1基因cDNA均存在第14外显子的c.1363C>T(p.R455X)杂合突变。(2)RB患者的基因组均存在RB1基因g.76460C>T杂合突变。(3)家系中的2例RB患者的AS-PCR都扩增得到特异条带,其他成员均无条带。结论(1)RB1基因c.1363C>T(p.R455X)突变为所研究RB家系患者的首要致病因素。(2)先证者的杂合突变遗传自他的父亲。(3)用RT-PCR/DNA测序相结合的方法筛查RB1基因突变,是目前RB变异组学研究中最方便、快捷、廉价的技术。