目的了解拉米夫定长期治疗可引起HBV的保守区YMDD基序和L528M发生突变情况,对核苷类似物药物治疗乙型肝炎进行用药指导。同时了解BCP区1762(A-T)/1764(G-A)双突变同重症肝炎、肝硬化和肝癌的发生的关系。方法克隆了拉米夫定耐药相关的YMDD野生株、YVDD突变株、YIDD突变株质粒;BCP区1762(A-T)/1764(G-A)双突变相关的野生型质粒、1762单独突变型质粒、1764单独突变型质粒和1762/1764双突变质粒。采用一种新的基于引物探针特异性的定量PCR方法进行准确的突变检测。结论1、以此质粒为标准品,验证了该方法可以用于这两种突变的检测。使用该方法检测了YMDD和BCP突变,检测结果表明这种方法的建立是成功的。2、采用该方法检测了临床拉米夫定耐药的YMDD突变,发现其中的确存在突变/野生混合型,有34例,占总例数的17.52%(34/194)。说明使用该方法可以早期及时发现突变株的存在,为临床治疗提供指导。3、采用该方法检测了肝炎和肝癌病人中BCP1762/1764双突变,发现在肝癌中突变率高于没有发生肝癌的肝炎病人,说明BCP双突变和肝癌的发生相关。