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目的: 本研究以“肺主皮毛”理论为指导,选取沙参麦冬汤及麦冬皂苷D为治疗药物探索其对体内外光老化模型的保护作用及机制。 方法: 体内实验研究方法:ICR小鼠经中波紫外线光照后,以不同剂量的沙参麦冬汤水提物灌胃。当光照造模40天累计剂量达5.46 J/cm2后,取小鼠背部正中皮肤,进行HE染色、胶原蛋白染色观察、并进行MMP-1蛋白表达量及SOD、MDA、GSH-Px、HA含量检测。体外实验研究方法:取对数生长期人皮肤成纤维细胞,MTS筛选麦冬皂苷D适宜浓度及光照剂量。光照皮肤成纤维细胞造模后加入相应浓度的麦冬皂苷D培养48h,DCF-DA法检测细胞内活性氧含量,Western Blot及ELISA法检测细胞及培养液中MMP-1、MMP-3蛋白表达水平。 结果: 1.体内部分:(1)光照造模后小鼠皮肤明显增厚,细胞排列不规则,沙参麦冬汤各浓度给药后小鼠真皮层炎性浸润细胞减少光老化病理改变得到改善。(2)Masson染色显示,空白组小鼠胶原纤维紧密规则而光照造模后小鼠胶原纤维出现断裂卷曲染色不均现象,且胶原蛋白阳性表达面积较空白组减少(P<0.05);阳性组及沙参麦冬汤高剂量组皮肤胶原染色较深且形态较规则。(3)免疫组化实验结果显示光照造模后MMP-1蛋白表达较空白组显著增多,阳性表达面积与各组有统计学差异(P<0.05),沙参麦冬汤给药组及阳性对照组MMP-1蛋白表达均低于模型组(P<0.05)。(4)小鼠经UVB光照后,模型组与空白组比较皮肤中MDA含量显著增加(P<0.05),SOD、GSH-Px活力降低(P<0.05)。给予沙参麦冬汤后可降低光照引起的MDA含量增多(P<0.05),并提高SOD、GSH-Px活力。(5)UVB光照引起小鼠皮肤内HA含量降低(P<0.05),给予沙参麦冬汤灌胃后,高、低剂量组HA含量明显增加,其中高剂量组与空白组接近。 2.体外部分:(1)经MTS实验筛选最终确定60μM、6μM、0.6μM为麦冬皂苷D给药高、中、低浓度,200 mJ/cm2为UVB光照剂量。(2)UVB光照引起模型细胞内ROS含量增多,与空白组具有显著性差异P<0.05,而光照后立即给予麦冬皂苷D或阳性药姜黄素(Cur)孵育后给药各组ROS含量均有所降低,且阳性对照组、高、中剂量组分别与模型组具有统计学差异(P<0.05),其中阳性组略优于高剂量组。(3)200mJ/cm2UVB光照后MMP-1与MMP-3蛋白表达量与空白组相比显著增高(P<0.05),光照造模后立即分别给予阳性药(Cur30μM)或高剂量麦冬皂苷D(60μM)孵育48h后,MMP-1和MMP-3蛋白表达量与模型组比较显著下降(P<0.05),其中麦冬皂苷D高剂量组作用优于阳性药组。 结论: 沙参麦冬汤及麦冬皂苷D对UVB引起的光老化小鼠及人皮肤成纤维细胞有一定的保护作用,其机制可能为增强皮肤内自身抗氧化酶活性、减少ROS的生成抑制MMP-1和MMP-3的异常增多,继而拮抗UVB对胶原蛋白及细胞外基质成分的损伤。