【摘 要】
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背景:口腔癌是口腔颌面部最为常见的恶性肿瘤之一,而口腔鳞状细胞癌（Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC）占了其中的90%左右。近些年来,以手术为主要方式,加以放化疗为辅的综合序列疗法也是逐渐地被采纳入临床治疗方案中。然而,口腔癌治疗方式的选择虽然在不断的多元化,但其存在着较高的转移率和复发率,因此患者们的五年生存率在总体上并没有体现出明显的改善。为此,继续寻找新型的口
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背景:口腔癌是口腔颌面部最为常见的恶性肿瘤之一,而口腔鳞状细胞癌（Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC）占了其中的90%左右。近些年来,以手术为主要方式,加以放化疗为辅的综合序列疗法也是逐渐地被采纳入临床治疗方案中。然而,口腔癌治疗方式的选择虽然在不断的多元化,但其存在着较高的转移率和复发率,因此患者们的五年生存率在总体上并没有体现出明显的改善。为此,继续寻找新型的口腔癌的治疗方式,用来减少复发率和改善预后显得格外的重要。近些年,采用中药中的成分或是天然化合物成分以治疗癌症成为了众多学者研究的热点。大黄素（3-甲基-1,6,8-三羟基蒽醌）是一种主要存在于大黄根茎和沙棘中的天然活性化合物,除了以往被大家所知晓的具有消炎和抗菌的作用外,它在抗肿瘤方面表现出的潜力和效果也渐渐的引起学者们的关注。已有研究证实大黄素对多类恶性肿瘤均具有明显的抗癌作用,促进肿瘤细胞凋亡。而且相较于临床常用的化疗药物,其毒性更小,副作用也相对较少。然而,大黄素在口腔鳞状细胞癌中是否同样具备类似的抗肿瘤作用,目前国内外的报道还相对较少。目的:探讨大黄素在CAL-27和SCC-15细胞系中发挥抗肿瘤作用时所相应的分子作用机制。方法:（1）采用浓度梯度的大黄素溶解液孵育CAL-27和SCC-15细胞,随后通过CC K-8法检测两种细胞系细胞的增殖活性,并计算各个时间段内细胞抑制率达到50%时所对应的大黄素药物的浓度(即大黄素对于CAL-27和SCC-15细胞的IC50);（2）凋亡试剂盒检测大黄素及miR-21对两种细胞凋亡能力的影响;（3）线粒体凋亡荧光实验检测大黄素及miR-21对两种细胞在线粒体凋亡途径凋亡能力的影响;（4）蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大黄素及miR-21对两种细胞中PTE N、Akt、p-Akt和Bax蛋白的表达影响;（5）qRT-PCR检测大黄素孵育两种细胞后miR-21和PTEN mRNA表达量的影响以及在转染miR-21后两种细胞中PTEN mRNA表达水平的变化。结果:（1）相比于对照组,不同浓度梯度的大黄素溶解液均可抑制CAL-27和SCC-15细胞的增殖能力（P＜0.05）,且在该过程中呈现出时间-浓度依耐性;（2）相比于对照组,大黄素药物能够明显提高两种细胞的凋亡能力（P＜0.05）,且在该过程中呈现出浓度依赖性;（3）相比于对照组,经大黄素溶解液诱导后的两种细胞中miR-21的mRNA及蛋白的表达均呈现出下降的趋势（P＜0.05）,而PTEN的mRNA及蛋白表达则增高（P＜0.05）;（4）相比于对照组,经大黄素孵育的两种细胞中p-Akt蛋白表达下降,相反的是,Bax蛋白表达增高（P＜0.05）;（5）与NC组相比,转染miR-21后,两种细胞的凋亡率有所下降,且PTEN和Bax蛋白的表达下降。结论:大黄素在体外实验中能够表现出抑制人口腔鳞状细胞癌CAL-27和SCC-15两种细胞系细胞的增殖能力并促进其发生凋亡,且这样的作用可能是和下调了miR-21和p-Akt的表达量及上调PTEN和Bax的表达量有关。
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