一、研究目的原发性支气管肺癌是一种严重威胁人类健康和生命的疾病。在20世纪末,肺癌已成为各种癌症死亡的首要原因。肺癌的发病随年龄增长呈上升趋势,在40岁后开始迅速升高,直到约70岁时达到高峰,而非小细胞肺癌占绝大多数。随着人口的平均寿命延长,社会老年化日益严重,老年肺癌的发病率逐年增加,对晚期老年NSCLC患者的研究逐步引起重视。目前西医学认为,对于老年非小细胞肺癌的治疗,单纯年龄因素不是肿瘤三大治疗手段——手术、化疗、放疗的禁忌症。但老年人由于脏器储备功能低下,常规的三大治疗手段受到限制,效果并不理想。老年人对治疗的耐受性以及维持较好的生活质量是治疗中必须重视的首要问题。在中国,中医药是治疗老年肺癌的一个重要手段,在肺癌的综合治疗中发挥了独特的作用,已被认为是肺癌综合治疗的五大治疗手段之一。中医中药在稳定瘤灶、调节机体功能、增加免疫力、改善临床症状、增加食欲、减轻放、化疗毒副作用、提高生活质量、延长带瘤生存期等方面有独特疗效。老年非小细胞肺癌患者是中医药治疗的优势人群,本研究拟观察益气除痰法的代表方药清金得生片治疗老年晚期非小细胞肺癌的各项指标,为评价中医药治疗老年非小细胞肺癌的临床疗效,规范、合理地治疗老年肺癌探索道路。转移是恶性肿瘤的基本生物学特征之一,是导致肿瘤治疗失败和患者死亡的最重要因素。随着肿瘤细胞生物学及分子生物学的研究进展,新的肿瘤治疗途径和靶点被发现,为中医药抗癌转移研究提供了新的思路和方法。中医药抗癌转移的研究仍处于起步阶段,尤其是对中药诱导失巢凋亡的研究。在实验方面,本论文拟研究清金得生片含药血清对人A549肺腺癌细胞失巢状态的影响,并探讨其对失巢凋亡密切相关的P-akt表达的调节作用。二、研究方法(一)临床研究:共完成合格病例48例,其中治疗组(清金得生片组)24例,对照组(安康欣胶囊组)24例,治疗前两组患者性别、年龄、病理类型、分化程度、临床分期、纳入前体重、卡氏评分和接受治疗情况相比较,经统计学处理,P＞0.05,差异无显著性,具有可比性。治疗组采用清金得生片治疗,对照组采用安康欣胶囊治疗,疗程2个月。观察两组瘤体、症状评分及体重等变化情况,检测两组治疗前后的CEA和ESR的变化,并进行药物毒性分析。(二)实验研究:采用多聚-HEMA悬浮培养A549腺癌细胞,模拟体内癌细胞失巢状态,以高中低含药血清、空白血清、顺铂分别作用于A549腺癌细胞,用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,Western-blot免疫印迹法检测各组细胞P-akt的表达。三、研究结果1、临床研究:(1)治疗后,两组患者瘤体变化情况比较,均未有病例达到CR和PR,但治疗组和对照组的瘤体稳定率分别达到79.17%和75%,经统计学处理,差异无显著性,但说明中药在稳定瘤体方面有一定优势。(2)两组患者临床症状的改善情况比较,治疗组在症状改善方面,有效率为54.17%,稳定率为29.17%,无效为16.67%,对照组在症状改善方面,有效率为50.00%,稳定率为33.33%,无效为16.67%,经χ~2检验,P＞0.05,差异无显著性。治疗组在改善口干、缓解胸痛方面,疗效较对照组明显(P＜0.05)。(3)两组患者体力状况的比较,在改善患者体力方面,治疗组和对照组的显效率和无效率相同,分别为4.17%和12.5%,治疗组有效率为33.33%,稳定率为50.00%;对照组有效率为20.83%,稳定率为62.50%,两组比较,经统计学处理,P＞0.05,差异无显著性。(4)两组体重均无恶化病例,治疗组和对照组患者的体重稳定率分别为83.33%和87.50%,经统计学处理,P＞0.05,两组比较差异无显著性;两组体重好转率分别为16.67%和12.5%;经统计学处理,P＞0.05,两组比较差异无显著性。(5)两组患者肿瘤指标CEA和ESR的比较,经统计处理,治疗组和对照组治疗前CEA、ESR相比,差异无统计学意义;治疗组和对照组CEA治疗后都有下降趋势,但P＞0.05,无统计学意义,治疗组治疗前后和对照组治疗前后的ESR相比较,P＜0.01,有统计学意义。说明治疗后,两组患者的血沉有明显的下降,病情趋于稳定。(6)对清金得生片药物不良反应的观察发现,清金得生片治疗前后患者血分析(WBC、NEU、HGB、PLT)、肝功能(AST、ALT)、肾功能(BUN、Cr)相比,经t检验,P＞0.05,差异无显著性,说明清金得生片治疗后未见明显的血液毒性和肝肾功能损害。(7)临床研究未发生严重不良事件和严重不良反应。综合本临床研究的结果,我们可以看出无论清金得生片还是安康欣胶囊对晚期老年非小细胞肺癌患者具有稳定瘤体作用、改善临床症状及评分,降低肿瘤指标CEA和ESR,稳定病情,而且无明显毒副反应,较好反映了中医药治疗癌症稳定病情,改善生活质量的优势。清金得生片组在改善口干、缓解胸痛方面,疗效较安康欣胶囊组明显。2、实验研究:(1)流式细胞仪检测结果:各中药含药血清组A549细胞的凋亡率均高于空白血清组,中药含药血清组随着剂量的增加,凋亡率也逐渐增加,说明中药清金得生片具有诱A549细胞凋亡的作用,而化疗药顺铂组的凋亡率最高。(2)Western-blot免疫印迹法检测结果:顺铂组的P-akt表达最低,为32,与空白血清组和低剂量组比较,均显著性降低;高剂量(30%)含药血清组P-akt表达为59,与空白血清组和低剂量组比较,均显著性降低(p＜0.05);中剂量组(20%)的P-akt表达为69,低剂量(10%)含药血清组的最高,为127,空白血清组的蛋白相对表达为122;在中药含药血清组中,随着浓度的逐渐降低,P-akt表达呈逐渐增高趋势。结合既往研究,分析认为清金得生片有诱导A549人腺癌细胞失巢凋亡的作用,其机制可能为中药含药血清通过抑制P-akt的活化,降低了下游端粒酶活性,下调了抗凋亡基因bcl-2的表达,从而诱导癌细胞的凋亡。