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目的:研究自制的环孢霉素A壳聚糖纳米微粒(CS(CyA)一NP)对兔结膜成纤维细胞(RCFs)增殖的抑制作用及对实验性兔小梁切除术后滤过道瘢痕化的预防作用。
方法:
1、CS(CyA).NP制备、表征和缓释性能检测:以生物降解医用材料壳聚糖(CS)为载体,采用离子凝胶法,以不同浓度CS溶液、三聚磷酸盐溶液(TPP)及环孢霉素A溶液(CyA)配比反应制备制备CS(CyA)-NP。并进行了形态、粒径、载药率及释药性能的观察。
2、CS(CyA)-NP对RCFs的影响:组织块培养法培养原代RCFs。4~6代的RCFs接种于96孔板培养24小时。设CS(CyA).NP组、CyA原药组、空白壳聚糖纳米微粒(CS-NP)组以及对照组4个组,加入含不同浓度药物的培养液后再培养24~72小时。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法观察药物对RCFs的抑制作用。
3、CS(CyA)一NP对小梁切除术后滤过道的影响:48只健康大耳白兔随机分为CS(CyA)-NP组、CyA原药组、空白CS-NP组、对照组4个组,均行单眼小粱切除术。术毕球结膜下注射CS(CyA)一NP32mg(0.5ml,载CyA2mg)、CyA原药2mg(0.5m1)、空白CS-NP30mg(0.5m1),对照组结膜下注射平衡盐溶液(BSS)0.5ml。分别在术后1天、3天、5天、1周、2周、4周、8周、12周检查眼压(IOP)、滤过泡、角膜、虹膜、前房、晶体、视网膜情况。根据Krofeld的标准判定滤过泡情况,记录滤过泡存留时间。术后1周、2周、4周、8周、12周取滤过泡及周围组织作光镜检查。术后1周取角膜、虹膜及视网膜作电镜检查。
结论:
1、离子凝胶法制备CS(CyA)一NP条件温和,快速简便,不需使用有机溶剂或表面活性剂。体外释放研究表明,CS(CyA)-NP具有良好的缓释效果。
2、CS(CyA)-NP对RCFs有抑制作用,并随时间和剂量的增加而增强。作用初期各剂量组CS(CyA)-NP的抑制作用低于或等于原药,随时间延长分别在不同时间点超过原药。空白CS-NP对RCFs也有较弱的抑制作用。
3、CS(CyA)-NP能抑制小梁切除术后滤过道区域成纤维细胞的增殖,有助于功能性滤过泡的维持,有效控制术后IOP,与CyA原药相比疗效更高副作用更小。本研究为临床上寻找一种新的青光眼小梁切除术后用药提供了实验基础,但尚需作进一步的深入研究。