论文部分内容阅读
目的: 通过筛选脱颗粒的检测指标及其影响因素研究建立和完善RBL-2H3细胞模型,结合整体动物实验,考察阳性药使用RBL-2H3细胞模型进行过敏反应实验的可行性。采用RBL-2H3细胞模型评价清开灵等中药注射剂的致敏性。 方法: (1)以阳性药C48/80直接刺激RBL-2H3细胞,检测细胞脱颗粒时释放组胺、β-氨基己糖苷酶、类胰蛋白酶水平;采用甲苯胺蓝、中性红染色及透射电镜观察细胞脱颗粒时形态变化。(2)采用DNP-BSA完全抗原及其特异性IgE抗体直接刺激RBL-2H3细胞,以介质β-氨基己糖苷酶释放水平为检测指标,考察抗原和抗体浓度、抗体致敏和抗原激发时间、细胞致敏后重培养时间等因素对细胞脱颗粒程度的影响,确定RBL-2H3细胞模型的最佳实验条件。(3)以卵蛋白、牛血清白蛋白为阳性药,考察皮下或腹腔注射、致敏液是否加佐剂等影响抗体血清致敏性强度的因素及抗体血清致RBL-2H3细胞脱颗粒的情况,并与大鼠PCA试验结果进行比较。(4)采用清开灵、血塞通、灯盏花素中药注射剂直接刺激RBL-2H3细胞评价其类过敏反应性并与小鼠耳廓蓝斑实验进比较,评价药物的类过敏反应性。(5)以清开灵、血塞通、痰热清注射剂致敏大鼠,制备抗体血清,测定血清总IgE水平、刺激RBL-2H3细胞脱颗粒情况并与大鼠PCA试验进行比较,评价药物过敏反应性。 结果: (1)RBL-2H3细胞脱颗粒水平随C48/80浓度增加而增加,细胞脱颗粒释放β-氨基己糖苷酶变化与组胺基本一致(2)在过敏反应细胞模型中,随抗体、抗原浓度增加,RBL-2H3细胞脱颗粒水平先增加后降低;在抗体致敏细胞8h内,细胞脱颗粒增加不明显,随着致敏时间增加,细胞脱颗粒水平迅速增加;细胞致敏后重培养24h,并体外激发2h能明显增加细胞活化效果。(3)皮下注射并加入氢氧化铝佐剂方式获得的抗体血清致敏性好;PCA模型能检测到出现明显蓝斑的OVA、BSA抗体血清最大稀释倍数分别为256、4,RBL-2H3细胞模型能检测到的β-氨基己糖苷酶明显释放的抗体血清最大稀释倍数分别为1024、16。(4)清开灵、血塞通、灯盏花素均具有一定直接刺激RBL-2H3脱颗粒作用,并呈现一定的剂量依赖性;小鼠耳廓蓝斑实验显示在临床推荐等效剂量范围内清开灵、血塞通均具有潜在致类过敏反应性。(5)清开灵、痰热清抗体血清中总IgE明显升高,血塞通抗体血清中总IgE水平有增加趋势,未见显著性差异;3种抗体血清均能致RBL-2H3细胞脱颗粒;PCA结果显示痰热清血清原液或4倍稀释后均能使大鼠背部皮肤出现明显蓝斑,血塞通、清开灵组大鼠背部皮肤可观察到无明显界限的弥漫性蓝染。 结论: (1)β-氨基己糖苷酶检测方法具有操作简便、快速、廉价的优势,可作为RBL-2H3细胞脱颗粒快速评价时的主要指标之一。(2)RBL-2H3细胞可用于对药物类过敏反应和过敏反应初步评价的细胞,具有一定可行性。(3)清开灵、血塞通、灯盏花素、痰热清等中药注射剂可能具有一定的潜在的致敏性。