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第一部分宫颈癌循环miRNA let-7a表达水平的研究目的研究宫颈癌循环miRNA中let-7a的表达水平,为宫颈癌的早期分子诊断提供依据。方法使用肝素钠抗凝管从重庆医科大学附属第一医院妇产科收集宫颈癌患者和正常健康人的血液标本各10例,宫颈癌以妇科检查和病理诊断结果为准,年龄在25-65岁,纤维素柱层析法提取血液总RNA,利用Real-time RT-PCR技术分别对两组标本中的let-7a进行检测。结果宫颈癌血液标本相比较于正常健康人血液标本,宫颈癌患者中let-7a的表达要明显低于正常健康人中的表达水平。结论let-7a参与了宫颈癌的发生发展并且在宫颈癌患者中的表达是下调的。第二部分TGF-β1和Smad4蛋白在宫颈癌组织中的表达目的研究宫颈鳞癌和腺癌组织中TGF-β1和smad4蛋白的表达并与宫颈癌细胞中结果相比较。方法重庆医科大学附属第一医院妇产科收集宫颈癌鳞癌、腺癌及宫颈上皮内瘤变组织切片,免疫组织化学及免疫荧光检测各组织切片中TGF-β1和smad4蛋白的表达差异。结果免疫组织化学和免疫荧光显示,与宫颈上皮内瘤变组织相比,宫颈腺癌和鳞癌中TGF-β1和smad4蛋白的表达明显增加。结论let-7a能显著抑制宫颈癌细胞的生长能力,其机制可能与let-7a通过下调TGF-β1/Smad信号途径中TGF-β1和smad4蛋白有关。第三部分let-7a通过TGF-β/Smad信号途径抑制宫颈癌细胞增殖目的研究let-7a对人宫颈癌细胞增殖的影响并探索其分子机制。方法培养保存于重庆医科大学基础医学院的宫颈癌细胞系(siha、 hela)和人永生化表皮细胞系hacat,采用Real-time RT-PCR技术对细胞系中let-7a的表达水平进行检测。将let-7a mimics及let-7a mimics nc用LipofectamineTM 2000转染宫颈癌Hela、siha、Caski细胞,并用Real-time RT-PCR对细胞中let-7a的表达进行检测；采用MTT法比较转染了let-7a mimics、let-7a mimics nc及未处理Hela细胞的增殖能力并绘制生长曲线；Western blot检测宫颈癌细胞株(Hela、siha 及 Caski)转染各组及未处理组中P53、TGF-β1及smad4蛋白的表达水平;TGF-β1基因的siRNA及siRNA nc转染Hela细胞,Western blot检测TGF-β1蛋白表达的变化,Real-time RT-PCR检测各转染组及未处理组中let-7a的表达变化。结果宫颈癌细胞系与人永生化表皮细胞系中let-7a的表达相比较,宫颈癌细胞系中let-7a的表达降低,结果与血液标本中let-7a的表达比较结果一致,提示let-7a可能是参与宫颈癌发生的重要因子。Real-time RT-PCR结果证实,与未处理组宫颈癌细胞相比,let-7a mimics组宫颈癌细胞中let-7a的表达水平显著增加,而let-7a mimics nc组宫颈癌细胞中let-7a的表达水平无明显变化,表明let-7a能成功转染入宫颈癌细胞中。MTT结果显示let-7a mimics组Hela细胞较未处理组细胞增殖能力明显降低; Western blot显示,与Hela细胞相比,转染let-7amimics的hela细胞中P53蛋白的表达明显增加,TGF-β1蛋白和smad4蛋白的表达明显降低；而siha和Caski两株细胞中的western blot发现转染let-7a mimics的细胞中P53蛋白、TGF-β1蛋白及smad4蛋白的表达明显降低。此外,Western blot显示TGF-β1 siRNA能明显抑制TGF-β1蛋白的表达,并且在hela细胞中沉默TGF-β1基因后let-7a的表达明显升高。以上结果提示过表达let-7a可能抑制宫颈癌细胞的增殖,TGF-β/Smad信号途径可能是let-7a抑制宫颈癌细胞增殖的重要机制。结论let-7a对宫颈癌的生长抑制作用至少部分是通过下调TGF-β1蛋白和smad4蛋白及调控p53蛋白的表达水平实现的。