论文部分内容阅读
近年来,纳米脂质体作为生物活性成分的载体,被广泛的应用于食品,药品和化妆品等领域中。纳米脂质体技术被认为是一种创新型的、有前景的运载递送系统,它主要用来提高活性成分的稳定性以及控制其释放,保证大量具有功能特性天然产物成分和药物得到高效的输送。莲房原花青素低聚体（Lotus seedpod oligomeric procyanidins,LSOPC）是从莲房中提取的一种被证实具有多种生理功能的天然产物。但是,研究人员同时也发现LSOPC的稳定性和脂溶性差、生物利用率很低,这些性质在一定程度上限制了LSOPC的运用。本文采用生物相容性材料利用脂质体技术对LSOPC进行包埋,制备LSOPC纳米脂质体。同时对LSOPC纳米脂质体的物理特性、稳定性和抗氧化性进行了研究。旨在为LSOPC纳米脂质体在食品、药品领域的应用提供理论基础和实验基础。另外,本文还研究了LSOPC纳米脂质体对黑色素生成的抑制作用和皮肤紫外（UVA和UVB）损伤的保护作用,以提高LSOPC在功能性化妆品领域的应用。1.莲房原花青素低聚体纳米脂质体的制备及物理性质研究采用逆向蒸发法,以大豆卵磷脂（Phosphatidylcholine,PC）、胆固醇（Cholesterol,CH）为膜材,辅助超声处理并加入非离子型表面活性剂制备LSOPC纳米脂质体。研究了PC与CH质量比、LSOPC添加量、吐温80添加量对LSOPC纳米脂质体粒径的影响。结果表明,LSOPC纳米脂质体的最佳制备工艺参数为:PC与CH的质量比为3:1,LSOPC浓度为0.33 mg/m L,吐温80的添加量为16.7mg/m L。最终得到了粒径分布呈现出正态单峰分布,范围在（10-100）nm,平均粒径为（35.57±0.08）nm的LSOPC纳米脂质体。确定了各因素对LSOPC纳米脂质体粒径影响的主次顺序:吐温80的添加量＞PC与CH质量比＞LSOPC添加量。在此基础上,对LSOPC纳米脂质体的物理特性进行了研究。结果表明,LSOPC纳米脂质体在透射电镜下的微观结构为球状的囊泡结构（10-100nm）,分布均匀且大小均一。考察了不同载量的LSOPC纳米脂质体的包埋率,发现当LSOPC的载量为1%时,脂质体有最高包埋率:（71.97±0.42）%。气相色谱测定LSOPC纳米脂质体溶剂（氯仿）残留的结果表明,利用此方法制备的LSOPC纳米脂质体中并未发现氯仿残留。与LSOPC溶液相比,LSOPC纳米脂质体的色度偏蓝。2.LSOPC纳米脂质体抗氧化性和稳定性研究通过抗氧化实验发现,LSOPC脂质体在制备初期清除ABTS自由基和铁还原能力不如LSOPC溶液。但是在4℃贮藏7d后,LSOPC纳米脂质体的抗氧化能力明显高于LSOPC溶液,与其相比,LSOPC溶液的抗氧化能力则显著下降。在ORAC法测定总抗氧化能力实验中,无论是在制备初期还是经过贮藏后,LSOPC纳米脂质体的抗氧化能力都优于LSOPC溶液。通过抗脂质过氧化实验发现,LSOPC能够有效的减少脂质过氧化物产物丙二醛的生成。此外,LSOPC纳米脂质体能提高LSOPC在弱碱性（pH=7.4）环境中的稳定性。LSOPC纳米脂质体在低温时比较稳定,而且低温有利于脂质体的长期贮藏,结果表明,LSOPC纳米脂质体在4℃贮藏7周后其平均粒径变化率仅为0.239。不同金属离子对LSOPC纳米脂质体影响不同,Fe3+、Cu2+、Zn2+、Pb2+的加入对脂质体的粒径有明显的影响。常用的食品添加剂,如糖、防腐剂,对LSOPC纳米脂质体的稳定性影响较小,只有当葡萄糖、蔗糖的质量分数达到10%以上时,LSOPC纳米脂质体的粒径才会发生变化,而苯甲酸钠和山梨酸钾在所考察的质量浓度范围内对脂质体的稳定性没有显著性影响。3.LSOPC纳米脂质体体外对黑色素形成的抑制作用LSOPC溶液和LSOPC纳米脂质体对酪氨酸酶的活性均有一定的抑制作用,研究发现,LSOPC溶液对单酚酶和二酚酶的IC50值分别为0.56±0.03、0.73±0.02mg/m L。而LSOPC纳米脂质体的IC50值分别为0.64±0.06、1.46±0.03 mg/m L。其中两者对单酚酶的抑制效果差别不大,而LSOPC溶液对二酚酶的抑制效果优于LSOPC纳米脂质体。同时还研究了两者对两种酶底物（L-酪氨酸和L-多巴）的荧光猝灭,结果表明,无论是LSOPC溶液和LSOPC纳米脂质体对两种酶底物均有明显的荧光猝灭效果,而且两者展现出类似的猝灭能力。但是过程中没有发生明显的红移或蓝移,这说明L-酪氨酸和L-多巴的构象没有发生变化。4.LSOPC纳米脂质体对人皮肤成纤维细胞紫外损伤的保护作用研究了LSOPC纳米脂质体对人皮肤成纤维细胞紫外（UVA和UVB）损伤的保护作用。实验结果表明,UVA和UVB能显著降低HFF-1细胞活力,而LSOPC纳米脂质体对无论是UVA还是UVB导致的紫外损伤均有明显的保护作用,细胞活力显著增强,而且其效果要优于LSOPC溶液和VC。UVB辐射会导致HFF-1细胞SOD活力的降低以及MDA含量的升高。与空白组相比,LSOPC纳米脂质体处理后的细胞SOD活力增强而丙二醛含量降低。此外,LSOPC纳米脂质体能提高UVA紫外损伤细胞中羟脯氨酸含量。