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研究目的:1.通过建立寒凝血瘀型EMs大鼠,动态的观察EMs异位病灶的形状变化、病理学改变、血流变及凝血功能的变化,判断对EMs大鼠进行药物干预的最好时间点。2.对成模EMs大鼠进行治疗性干预,观察痛愈舒颗粒对大鼠异位病灶的病理形态的改变及对OPN表达的影响,探讨痛愈舒颗粒对寒凝血瘀型EMs的作用,为今后内异症的治疗提供实验依据。3.对已成模的EMs大鼠进行预防性干预用药,观察痛愈舒颗粒预防性剂量对大鼠OPN表达的影响及EMs大鼠异位病灶的病理学改变和各血液指标的变化,为内异症的预防性治疗用药提供依据。实验方法:1.以“自体子宫内膜移植法”与“冰水混合物浸泡法”复合建立寒凝血瘀型EMs大鼠模型,在造模后3日、5日、4周、6周、8周时各随机抽取4只大鼠,进行寒凝血瘀的表征观察,同时对异位病灶的形态与病理学进行观察。2.对EMs大鼠进行治疗性用药干预,HE染色法观察对照组、模型4周组、8周组、痛愈舒低剂量组、痛愈舒中剂量组、痛愈舒高剂量组及西药组每组异位病灶的病理学改变,对各组异位病灶免疫组化法检测其OPN的表达。3.对EMs大鼠进行预防性用药干预,应用HE染色法对各实验组异位病灶进行病理学改变的观察,采用免疫组化的方法检测各组异位病灶中OPN的表达。结果:1.造模3天的大鼠子宫内膜组织水肿明显,其间可见炎性细胞;造模5天的大鼠子宫内膜,间质细胞相对变多,组织水肿减轻,但异位组织尚未形成完整内膜上皮结构。造模4周时大鼠子宫内膜上皮细胞呈柱状排列,间质细胞明显增多,腺体数量增多,血管丰富,已经形成了典型的异位内膜组织。造模6周、8周的大鼠子宫内膜与造模4周相比无明显差异。模型组大鼠具有寒凝血瘀表征及血液流变学和凝血功能的异常,各模型组之间的血液指标变化无统计学意义。2.药物灌胃后,各剂量的痛愈舒颗粒组及西药组的模型大鼠在异位病灶体积上均有缩小,且上皮细胞萎缩,排列不连续,间质细胞减少,腺体数量减少,其中以痛愈舒高剂量组和西药组最为明显。且痛愈舒颗粒各组对大鼠寒凝血瘀表征及一般状态的改变较为明显,西药组没有改变,且出现体重增加不良效果。痛愈舒颗粒各组对模型大鼠的血液指标的改善较为明显,西药组与模型组相比差异没有统计学意义。与空白对照组相比,模型4、8周组及各药物治疗组的OPN表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);各药物治疗组的OPN表达与各模型组相比,明显降低,且造模8周组与造模4周组相比,OPN的表达升高更加显著,差异具有统计学意义(P<0.05):痛愈舒各组、西药组与造模8周组相比,OPN的表达降低明显,差异具有统计学意义(P<0.05);痛愈舒高剂量组与西药相比,OPN的表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.在预防性用药实验中,预防组大鼠没有明显的寒凝血瘀表征,异位病灶的体积缩小,与痛愈舒高剂量组相比间质细胞更少,腺体变形、减少明显,纤维化程度更高,出现退行性改变。与空白对照组相比,模型4周组、痛愈舒高剂量组OPN的表达升高明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。痛愈舒高剂量组、预防组与模型4周组相比,OPN的表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);而预防组与痛愈舒高剂量组相比,OPN的表达降低更为明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.本实验采用自体内膜移植法和冰水浸泡法复合建立寒凝血瘀型内异症大鼠模型,动态的观察EMs异位病灶的形状变化、病理学改变、血流变及凝血功能的变化,确定了造模5日时是预防性给药的开始时间,造模4周时是治疗性给药的时间点。2.与正常子宫内膜相比,寒凝血瘀型内异症大鼠异位内膜中OPN的表达明显升高。提示其异常增高的表达在内异症的发生、发展中具有重要作用。3.痛愈舒颗粒治疗性用药可以有效抑制内异症病情的发展,使异位病灶萎缩、退化,且在改善内异症大鼠寒凝血瘀表征、血液流变学及凝血功能方面,效果明显,没有西药所致的副作用,且抑制了异位病灶中OPN的表达,推测其可通过抑制OPN的表达对内异症病情的进展进行抑制。痛愈舒高剂量为治疗寒凝血瘀型内异症的最佳剂量。4.痛愈舒颗粒预防性用药可以使异位病灶组织退化、失去正常形态,且其治疗效果要优于治疗性用药,并且抑制了OPN的表达,痛愈舒颗粒对内异症具有早期防治的作用。