当归芍药散防治动脉粥样硬化的实验研究

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动脉粥样硬化(Atherosclerosis AS)是心脑血管病的主要病理基础,它所导致的心脑血管疾病是对人类健康最有威胁的一类疾病,其死亡率已占人群死亡率的首位。目前国内外医学对其尚未有满意治疗,虽然从较公认的几种病机学说出发,采用调整血脂、抗氧化、防止血管内皮损伤、抗血栓形成及应用钙拮抗剂等方法,取得了长足发展,但一些副作用及较高的复发率乃致死亡率仍居高不下。鉴于本病的发病机制至今尚未完全明了,探求有效的治法已势在必行。据其发病特点和临床表现,本病属中医学[1-4]“心痛”“胸痛”、“心悸”、“眩晕”等范畴,病机主要为:痰、瘀、虚。中医学对其有较为系统、深刻的认识,并有大量有效方药记载,如何挖掘并发挥这些方药,在目前防治动脉粥样硬化工作中已显颇为重要。《金匮要略》妇人篇“当归芍药散”,由当归、芍药、川芎、茯苓、白术、泽泻六味药组成,具有和血化瘀、祛痰化浊、补脾祛湿之功效。遵循中医“谨守病机,异病同治”原则,并根据我导师阎艳丽教授的临床经验,我们选择该方,通过动物实验对其防治动脉粥样硬化进行了实验研究,旨在为防治动脉粥样硬化提供理想的中医经方治疗,为临床应用提供可靠的实验依据。 <WP=4>目的:观察当归芍药散对实验性动脉粥样硬化家兔的影响,并探讨当归芍药散防治动脉粥样硬化的作用机制 方法:1治疗药物(“当归芍药散”)用量计算 按照原方药物用量比例(当归:芍药:川芎:茯苓:白术:泽泻为3:16:8:4:4:8),参照现在临床常用量当归为10g,其他五味药按比例计算,再据“人体—家兔体表面积比值法”[5]换算家兔的用药量为低剂量组:生药24g/kg.d及高剂量组:生药48g/kg.d。2动物分组处理 据文献[6],采用高脂饲料喂养法复制动脉粥样硬化动物模型。将体重1.5-2.5kg的健康新西兰纯种雄性大白兔50只随机分为5组,每组10只,分别为空白对照组,模型对照组,当归芍药散低剂量(24g/kg.d)组,当归芍药散高剂量(48g/kg.d)组及阳性药物(吉非罗齐0.15g/kg.d)对照组。空白对照组喂普通饲料;模型对照组喂高脂饲料(饲料配方:普通饲料中含1%胆固醇,4%蛋黄粉,10%猪油);当归芍药散低剂量组喂高脂饲料加当归芍药散汤剂(饲料配方:每kg高脂饲料中含当归芍药散浓缩液48ml,相当于生药480g,当归芍药散汤剂在饲料加工过程中匀掺于高脂饲料中);当归芍药散高剂量组喂高脂饲料加当归芍药散汤剂(饲料配方:每kg高脂饲料中含当归芍药散浓缩液96ml,相当于生药960g);阳性药物对照组喂高脂饲料加吉非罗齐(饲料配方:高脂饲料中含0.15%吉非罗齐)。各组每兔每天进食总量相等,限制为100g。动物分笼饲养,自由饮水,连续喂养2个月。3指标测定 分别于实验第二周、第四周、第八周(采血前禁食12小时)耳中央动脉取血,测定其血清总胆固<WP=5>醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL-c)含量,并由Friedewald公式:LDL-c=TC—(1/5TG+HDL-c)推算出低密度脂蛋白(LDL-c)的含量,由AI = TC-HDL-c/HDL-c公式计算动脉粥样硬化指数(AI)。第八周取血完毕,气栓法处死家兔,解剖后立即分离并取下全部主动脉(从主动脉起始部到腹主动脉分叉处),剔除血管外结缔组织及脂肪,每组随机取4个主动脉起始部2cm标本, PBS中清洗血块后,置70%乙醇中,以备流氏细胞检测用。另取每个主动脉标本上段2cm,置于10%福尔马林溶液中固定,常规石蜡切片,HE染色,光镜观察。结果:1 对血清血脂及AI的影响 实验8周后,模型组血清TC、TG、HDL-c、LDL-c含量及AI明显高于空白对照组(P<0.01);当归芍药散低剂量组TC、TG、LDL-c含量及AI明显低于模型组(TC 9.87±3.40/14.10±7.72 P<0.05, TG 2.04±0.97/4.03±3.63 P<0.05, LDL 5.89±2.91/10.81±6.52 P<0.01,AI 1.73±0.72/4.5±1.66 P<0.01),HDL-c明显高于模型组(3.57±0.77/2.48±0.86 P<0.01); 当归芍药散高剂量组TC、TG、LDL-c含量及AI明显低于模型组(TC 8.23±3.47/14.10±7.72 P<0.01, TG 1.81±0.56/4.03±3.63 P<0.01, LDL-c 4.07±3.03/10.81±6.52 P<0.01,AI 1.13±0.63/4.5±1.66 P<0.01), HDL-c明显高于模型组(3.8±0.69/2.48±0.86 P<0.01)。说明当归芍药散高、低剂量组均能有效调整血脂,降低AS发生系数的作用,其中高剂量组较低剂量组有更好效果。2对主动脉平滑肌细胞的影响 模型对照组家兔主动脉平滑肌细胞的凋亡率、增殖率、Bcl-2和Bax蛋白表达<WP=6>量均高于空白对照组(P<0.01或P<0.05);当归芍药散低、高剂量组家兔主动脉平滑肌细胞的凋亡率均明显高于模型对照组(分别为13.85±3.83/8.85±0.95 P<0.05, 15.63±2.15/8.85±0.95 P<0.01)。高剂量组中过高表达可以促进细胞凋亡的Bax表达量明显高于模型组 ( 1.78±0.21 / 1.54±0.04 P<0.05)。而低、高剂量组增殖率明显低于模型对照组(分别为18.23±1.12/21.59±0.14 P<0.01, 16.54±1.53 /21.59±0.14 P<0.01 ),高剂量组中对凋亡起抑制作用的Bcl-2的表达量也相应低于模型对照组(1.47±0.03 /1.71±0.04 P<0.01)。3主动脉病理组织学观察 空白对照组家兔主动脉血管壁内?
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