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天疱疮是皮肤和黏膜受累的器官特异性自身免疫病,主要包括寻常型和落叶型两种临床类型,其病因是患者体内产生分别直接针对桥粒芯糖3(Dsg3)和/或桥粒芯糖1(Dsg1)的IgG自身抗体。这些抗Dsg3和Dsg1的IgG抗体不仅参与了大疱形成,其滴度的高低还与疾病的严重度密切相关。鉴于CD4+T细胞在B细胞产生抗体过程中的重要辅助功能,自身反应性CD4+T细胞在天疱疮发病过程中起着非常关键的作用。同时参与CD4+T细胞和B细胞相互作用的共刺激分子保证了抗体的有效产生。然而,天疱疮患者T细胞如何辅助B细胞发挥功能及哪类B细胞主要参与产生抗体,并导致疾病的发生、发展目前尚不清楚。(1)天疱疮患者T-B细胞相互作用的分子机制研究本研究结果显示天疱疮病人外周CD4+T细胞与正常对照相比较处于相对活化的状态,并且其表面共刺激分子ICAM-1、ICOS、CD40L和OX40的表达显著上调。体外细胞黏附实验结果表明天疱疮患者来源的CD4+T细胞与B细胞之间的黏附显著增加,并且与体外CD4+T和B细胞共培养中IgG、IgM和特异性抗体水平的增加相一致。此外,采用相应阻断抗体阻断这些分子与其配体之间的相互作用,不同程度地影响了CD4+T和B细胞的存活、抗体水平及与抗体产生相关的CD19hii B细胞的产生。结果显示,抗ICAM-1、ICOS、CD40L和OX40阻断抗体的加入显著降低了CD4+T细胞和B细胞的数量、IgG和IgM的水平及CD19hii B细胞的比例,其中抗ICAM-1、CD40L和OX40阻断抗体的效应强度均显著大于抗ICOS组。我们的结果为T细胞通过早期黏附和诱导B细胞分化进而促进B细胞发挥功能提供了直接的证据,并且揭示了ICAM-1、ICOS、CD40L和OX40在T细胞依赖的抗体产生中的不同作用,进一步对寻找抗体介导的自身免疫病的治疗靶点提供分子基础。(2)CD19hii B细胞的特性及其对自身免疫性疾病发病的影响研究天疱疮和系统性红斑狼疮分别是系统性和器官特异性的抗体介导的自身免疫病。鉴于自身抗体在两种疾病发病中的重要作用,B细胞的分化和功能在其发病中的作用值得深入研究。现阶段的研究中,我们发现并且鉴定了存在于天疱疮、SLE患者外周血及人类扁桃体中的CD19hii B细胞。该群B细胞可以通过采用活化的CD4+T细胞与自体来源的B细胞共培养来诱导产生,同时发现培养上清中产生更高水平的IgG和IgM。与CD19loo B细胞相比较,CD19hii B细胞表面高表达HLA-DR、IgG、IgM和共刺激分子的受体或配体如ICAM-1、ICOSL、CD40L和OX40L,同时可以产生IgG。通过基因芯片测定,参与B细胞生成、活化、分化、生存和抗体产生相关信号通路包括BCR、TLR、MAPK、Jak-STAT、趋化因子等通路中的多种基因在CD19hi B细胞中显著上调;此外,这些信号通路中关键分子如Syk、Erk、Btk、NF-κB和Pyk2等的磷酸化水平无论是在体外诱导产生的CD19hii B细胞内,还是SLE和天疱疮患者外周血中的CD19hii B细胞内均显著增加。来源于天疱疮和SLE外周的CD4+T细胞和B细胞进行体外共培养后也促进了CD19hi B细胞的产生。更加有意义的是,SLE和天疱疮患者外周血中CD19hii B细胞的比例与血清中IgG和IgM的水平呈正相关。我们的研究结果提示存在于患者外周血中的CD19hii B细胞具有活化B细胞的表型和基因表达谱,其产生需要CD4+T细胞的辅助,而CD19hii B细胞的比例与血清中IgG和IgM的水平正相关性也提示了CD19hii B细胞可能作为评判疾病发展的一个重要指标。总之,天疱疮患者外周CD4+T细胞存在异常活化,其表面的共刺激分子的表达明显升高,这些异常活化的CD4+T细胞通过表面高表达的共刺激分子增强与B细胞的相互作用,进而促进或维持B细胞的活化,并进一步分化成为与抗体的产生密切相关的CD19hii B细胞,其中后者可能进一步产生特异性抗Dsg的致病性抗体,诱发或加重疾病的进展。同时,我们也对CD19hi B细胞进行了鉴定,解析了其来源、表型、功能、基因表达谱及其在疾病发病中的重要作用。上述研究结果为T细胞的活化对B细胞抗体产生的分子机制提供重要的依据,也为天疱疮及其他自身免疫性疾病的发病机制的研究提供新的理论基础和潜在的治疗靶点。