【摘 要】
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本文根据来自于草菇cbh 1-1（CBD1）和热纤梭菌的cipB（CBM3）的CBD序列设计了—系列相互重叠的引物,利用PCR的方法得到含双纤维素结合域的基因片段。通过限制性内切酶酶切连接后与表达质粒pET-32b相连,再转入大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达。SDS-PAGE检测到四种目的蛋白CBM3-GS-CBD1、CBM3-celc-CBD1、CBM3-GS-CBM3、CBD1-celc-
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本文根据来自于草菇cbh 1-1（CBD1）和热纤梭菌的cipB（CBM3）的CBD序列设计了—系列相互重叠的引物,利用PCR的方法得到含双纤维素结合域的基因片段。通过限制性内切酶酶切连接后与表达质粒pET-32b相连,再转入大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达。SDS-PAGE检测到四种目的蛋白CBM3-GS-CBD1、CBM3-celc-CBD1、CBM3-GS-CBM3、CBD1-celc-CBD1均能正确表达。CBD1-celc-CBD1仅在诱导温度降低至20℃时才会出现可溶性表达,其余重组蛋白在30℃时即可得到可溶性蛋白。采用NI-NTA亲和纯化的方法得到了纯化的目的蛋白,比较它们对Avice1、磷酸润涨纤维素、Whatman 1号滤纸及纸浆的吸附特性：（1）家族1 CBD对结晶型纤维素吸附量最高,其中CBD1-celc-CBD1对Wicel的吸附最大值为CBM3-GS-CBM3的三倍。CBM3-GS-CBD1则对磷酸润涨纤维素吸附最高,对（?）Whatman 1号滤纸吸附最多的为CBM3-celc-CBD1,对纸浆吸附量较高的为CBD1-celc-CBD1。（2）连接肽（linker）也对吸附有一定的影响,含有弹性linker的CBM3-GS-CBD1更倾向于吸附Avicel,而含有草菇外切-β-葡聚糖酶CBH I-I native linker的CBM3-celc-CBD1吸附Whatman 1号滤纸能力更强。（3）此外,我们研究了四种蛋白对（?）Wicel吸附的可逆性,其中仅有CBD1-celc-CBD1的吸附是可逆的。在对纸张机械性能的影响上,CBM3-GS-CBM3对纸张耐折度和抗张强度的增加最为明显,分别提高了27.4%和15.5%。CBD1-celc-CBD1也有16.7%和12.6%的提高。CBM3-GS-CBD1、CBM3-celc-CBD1对纸浆有一定的助滤作用。经四种蛋白处理的纸张防水性均有提高。本论文首次系统的研究了草菇CBH I-I的CBD和热纤梭菌CipB的CBD的吸附特性及差异,和它们在纸张性能改善方面的应用。同时,首次比较了不同构造的连接肽对双CBD融合蛋白的影响。以上结果显示,重组蛋白可用于改善纸品纤维的表面性质和机械性能。此外,家族1的CBD能够可逆性吸附纤维素这一特点还可用于纤维再利用。本文为开发一种新型生物纸浆增强剂提供了理论依据和实践基础。
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