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目的:本实验通过观察中药复方真武汤对扩张型心肌病小鼠的影响,从多个层次探讨其对转基因扩张型心肌病小鼠作用机制的研究,为治疗扩张型心肌病提供新的思路和理论依据。材料与方法:选用cTnTR141W转基因扩张型心肌病小鼠60只和C57BL/6J正常小鼠15只,均购于中国医学科学院实验动物研究所,饲养于辽宁中医药大学动物实验中心。4个月龄C57BL/6J正常小鼠15只作为正常组,4个月龄cTnTR141W转基因扩张型心肌病小鼠60只,按照体重随机分为4组,模型组、卡托普利组、真武汤高剂量组及真武汤中剂量组,每组各15只。正常组及模型组给予等量生理盐水灌胃,按人和小鼠之间等效剂量换算方法,计算出小鼠灌胃剂量分别是:中药组予真武汤灌胃,真武汤中剂量组用药量为18.2g/kg/d（生药）;真武汤高剂量组用药量为36.4g/kg/d（生药）;卡托普利组予卡托普利灌胃,卡托普利用药量为10mg/kg/d。每日2次灌胃,每次0.3ml,连续给药1个月。实验一采用切片扫描及光镜下观察心脏病理改变;透射电镜下观察心肌细胞的超微结构;HpaII酶切和RT-PCR鉴定各组小鼠心肌组织中cTnTR141W转基因的表达水平;小动物彩色多普勒超声检测小鼠心脏功能,包括射血分数和短轴缩短率;酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清中BNP水平。实验二采用masson染色法光镜下观察小鼠心肌组织中胶原纤维的含量,RT-PCR及westernblotting检测各组小鼠心肌组织中Col1a1、Col3a1 mRNA及蛋白表达。实验三采用RT-PCR及westernblotting检测各组小鼠心肌组织中肌动蛋白α1（Acta1）、心肌钙离子转运ATP酶（Atp2a2）、脑钠肽（Nppb）mRNA及蛋白表达。结果:1、切片扫描及光镜下观察心脏病理改变:模型组cTnTR141W转基因小鼠的心脏与正常组小鼠心脏相比较,明显增大,左心室明显扩张,室壁变薄;真武汤给药后小鼠的心脏变小,左心室腔较模型组减小,室壁相对厚度变大;光镜下左心室心肌HE染色显示:模型组小鼠心肌与正常组小鼠心肌相比排列紊乱,真武汤给药后心肌细胞排列较整齐。2、透射电镜:观察5个月龄小鼠心脏显示,正常组小鼠的心肌纤维排列规整,结构清晰,线粒体丰富,闰盘整齐而平滑;而模型组小鼠的心肌纤维变细,溶解,甚至消失,Z带消失,线粒体肿胀,空泡化,闰盘卷曲,部分溶解;卡托普利组线粒体绝大多数较为完整,个别出现嵴断裂,且电子密度不均一,肌丝束断裂、溶解、消失,闰盘边缘较为清晰,但存在局部断裂现象,且仍有模糊不清的边界;真武汤给药组线粒体大部分较为完整,但个别线粒体出现局部空化,嵴断裂现象,肌丝束局部出现断裂、溶解,闰盘边界较为清晰,但局部有模糊现象,心肌纤维的排列较模型组规整。以上结果显示真武汤干预后,cTnTR141W转基因扩张型心肌病小鼠心肌超微结构的破坏有所减轻。3、转基因扩张型心肌病小鼠鉴定:经HpaII酶切和RT-PCR鉴定,正常组经酶切后未检测到转基因cTnTR141W,模型组转基因cTnTR141W是内源性cTnT的1.13倍。4、心脏彩超检测左室舒张末内径（LVEDd）、左室射血分数（EF%）、短轴缩短率（FS%）:模型组与正常组比较,心室壁变薄,心腔增大,室壁运动降低,左室舒张末内径增大,左室射血分数及短轴缩短率均减小,心肌收缩功能下降。真武汤给药后,左室舒张末内径无论是高剂量组还是中剂量组均有不同程度降低,左室射血分数及短轴缩短率均有不同程度增加。5、ELISA检测血清中BNP水平:各组小鼠血清中BNP水平的比较:与正常组比较,模型组BNP水平显著升高（P<0.01）,有统计学意义,模型组小鼠心功能降低,说明转基因扩张型心肌病小鼠存在心功能减低,卡托普利组、真武汤中高剂量组BNP水平均有所升高,但无统计学意义;与模型组比较,卡托普利组、真武汤中高剂量组BNP水平均显著降低（P<0.01）;与阳性药物（卡托普利）组比较,真武汤中高剂量组BNP水平差异无统计学意义,说明真武汤在一定程度上能改善扩张型心肌病小鼠的心脏功能,与卡托普利组比较具有非劣性。6、小鼠心肌组织masson染色:通过光镜Masson染色可见正常组小鼠心肌排列整齐,胶原纤维含量较少;模型组转基因小鼠心肌排列比较紊乱,心肌间质胶原纤维明显增多;卡托普利组与真武汤组心肌细胞排列较整齐,胶原较少,间质的纤维化减轻。7、各组心肌组织Col1a1、Col3a1 mRNA及蛋白表达比较:与正常组比较,模型组小鼠心肌组织Col1a1 mRNA表达显著升高（P<0.01）,卡托普利组、真武汤高中剂量组小鼠心肌组织Col1a1 mRNA表达均有不同程度的升高（P<0.01）;与模型组比较,卡托普利组、真武汤高中剂量组小鼠心肌组织Col1a1 mRNA表达均有不同程度的降低（P<0.01）;与卡托普利组比较,真武汤高剂量组小鼠心肌组织Col1a1 mRNA表达较高,但无明显统计学差异,真武汤中剂量组小鼠心肌组织Col1a1mRNA表达较高,有统计学差异（P<0.01）;与真武汤高剂量组相比较,中剂量组小鼠心肌组织Col1a1 mRNA表达有所升高（P<0.05）。与正常组比较,模型组小鼠心肌组织Col3a1 mRNA表达显著升高（P<0.01）,卡托普利组、真武汤高中剂量组小鼠心肌组织Col3a1 mRNA表达均有不同程度的升高（P<0.01）;与模型组比较,卡托普利组、真武汤高中剂量组小鼠心肌组织Col3a1 mRNA表达均有不同程度的降低（P<0.01）,其中真武汤高剂量组降低最显著;与卡托普利组比较,真武汤高剂量组小鼠心肌组织Col3a1 mRNA表达较低,但无明显统计学差异,真武汤中剂量组小鼠心肌组织Col3a1 mRNA表达较高,有统计学差异（P<0.01）;与真武汤高剂量组相比较,中剂量组小鼠心肌组织Col1a1 mRNA表达有所升高（P<0.01）。与正常组比较,模型组小鼠心肌组织Col1a1蛋白表达明显升高（P<0.01）,卡托普利组小鼠心肌组织Col1a1蛋白表达有所减低,但无明显统计学差异,真武汤高剂量组小鼠心肌组织Col1a1蛋白表达与正常组的表达相当,无明显统计学差异,真武汤中剂量组小鼠心肌组织Col1a1蛋白表达高于正常组（P<0.01）;与模型组比较,卡托普利组、真武汤高中剂量组小鼠心肌组织Col1a1蛋白表达均有所下降（P<0.01）,但以卡托普利组下降最为明显,真武汤高剂量组次之,真武汤中剂量组下降最少。与正常组比较,模型组、卡托普利组小鼠心肌组织Col3a1蛋白表达明显升高（P<0.01）,但以模型组升高最为显著,真武汤高中剂量组未见显著差异（P>0.05）;与模型组比较,卡托普利组、真武汤高中剂量组小鼠心肌组织Col3a1蛋白表达显著降低（P<0.01）;各用药组组间比较,卡托普利组下调Col3a1蛋白表达作用最佳（P<0.01）,真武汤高中剂量组组间未见明显差异（P>0.05）。8、各组心肌组织Acta1、Atp2a2与Nppb mRNA及蛋白的表达:与正常组比较,模型组、卡托普利组、真武汤高、中剂量组小鼠心肌组织Acta1 mRNA表达均有显著差异（P<0.01,vs卡托普利组P<0.05）;与模型组比较,卡托普利组、真武汤高、中剂量组小鼠心肌组织Acta1 mRNA表达显著下降（P<0.01,vs真武汤中剂量组P<0.05）;卡托普利组、真武汤高、中剂量组组间比较小鼠心肌组织Acta1 mRNA表达未见显著差异（P>0.05）。与正常组比较,卡托普利组小鼠心肌Atp2a2 mRNA表达未见显著差异（P>0.05）,其余各组均有显著差异（P<0.01）,与模型对照组比较各用药组Atp2a2 mRNA表达显著上调（P<0.01,vs真武汤中剂量组P<0.05）,各用药组间间比较发现卡托普利组与真武汤高剂量组提高小鼠心肌Atp2a2 mRNA表达效果最佳（卡托普利组vs真武汤高剂量P>0.05）。与正常组比较,模型组小鼠心肌组织Nppb mRNA表达明显升高（P<0.01）,各用药组心肌组织Nppb mRNA表达均有不同程度升高（P<0.01）;与模型组比较,各用药组Nppb mRNA表达显著下降（P<0.01）,以真武汤高剂量组下降最显著;与卡托普利组和真武汤中剂量组相比较真武汤高剂量组Nppb mRNA表达显著下降（P<0.01）,卡托普利组与真武汤中剂量组组间比较未见显著差异（P>0.05）。与正常组比较模型对照组心肌组织Acta1蛋白表达显著升高（P<0.01）,各用药组未见显著差异（P>0.05）;与模型组比较,各用药组心肌组织Acta1蛋白表达显著降低（P<0.01）;各用药组组间比较未见显著差异（P>0.05）。与正常组比较卡托普利组Atp2a2蛋白表达未见显著差异（P>0.05）,其余各组均显著差异（P<0.01）;与模型组比较,各用药组心肌组织Atp2a2蛋白表达显著升高（vs真武汤中剂量P<0.05,P<0.01）;各用药组组间比较发现卡托普利组上调Atp2a2蛋白表达效果最佳（P<0.01）,真武汤高剂量组上调Atp2a2蛋白表达效果优于真武汤中剂量组（P>0.05）。与正常组比较模型组心肌组织Nppb蛋白表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各用药组心肌组织Nppb蛋白表达显著降低（P<0.01）;与卡托普利组相比真武汤高、中剂量组心肌组织Nppb蛋白表达均显著降低（P<0.01）,真武汤中、高剂量组之间比较未见显著差异（P>0.05）。结论:1、真武汤能够改善cTnTR141W转基因扩张型心肌病小鼠的心脏功能,包括EF和FS值,降低血清中BNP的表达。2、真武汤能够改善cTnTR141W转基因扩张型心肌病小鼠的心脏结构及超微结构,下调cTnTR141W的表达。3、真武汤通过下调心肌组织中Col1a1与Col3a1 mRNA及蛋白表达,抑制心肌细胞纤维化,改善心室重构。4、真武汤通过下调心肌组织中肥大标志物Acta1、Nppb mRNA及蛋白表达,上调Atp2a2mRNA及蛋白表达,抑制心肌细胞肥大过程,改善心室重构,起到防治DCM的作用。