论文部分内容阅读
目的探索一种具有靶向性、副作用少、同时具备诊断和治疗作用的针对头颈鳞癌的治疗方式。方法分别通过被动载药和主动载药的方式制备载吉非替尼脂质体和载氯喹脂质体,改变不同脂质成分之间的比例,使两种脂质体的包封率尽可能高。制备超声微泡,再将制得的脂质体通过生物素-亲和素的方式与微泡连接,荧光显微镜下观察两者的连接情况。体外评估三种HNSCC细胞CAL-27、HN-4、HN-30对吉非替尼单独给药、氯喹单独给药、吉非替尼联合氯喹给药的敏感性,选择对联合治疗最敏感的细胞株。将敏感株细胞分为6组:PBS缓冲液+超声组、载吉非替尼脂质体+载氯喹脂质体+超声组(GE-Lipo+CQ-Lipo)、载吉非替尼微泡-脂质体模型+超声组(MB-GE-Lipo)、载氯喹微泡-脂质体模型+超声组(MB-CQ-Lipo)、载吉非替尼微泡-脂质体模型+载氯喹微泡-脂质体模型组(MB-GE-Lipo+MB-CQ-Lipo)、载吉非替尼微泡-脂质体模型+载氯喹微泡-脂质体模型+超声组(MB-GE-Lipo+MB-CQ-Lipo,with US),用MTS试剂盒检测各组对敏感株细胞增殖的抑制效果。结果当EPC:Chol=5:1时,载吉非替尼脂质体包封率为(49.7±5.9)%,与2:1组相比包封率有显著差异,粒径为(74.55±0.80)nm,PDI﹤0.2。2:1和8:1组比较包封率无显著性差异(P﹥0.05),2:1分别和10:1、20:1组比较均为(P﹤0.05),差异有统计学意义,5:1、8:1、10:1、20:1四组之间两两比较均无显著性差异(P﹥0.05)。载氯喹脂质体平均粒径为(68.94±8.18)nm,Zeta电位(-2.04±0.18)m V,PDI<0.2,包封率为(92.33±2.52)%。荧光显微镜下可见微泡周围有一圈绿色荧光。三种细胞体外实验,CAL-27细胞和HN-30细胞在吉非替尼浓度为IC50、氯喹浓度为50μg/ml时,联合治疗后细胞增殖抑制情况的差异有统计学意义(P<0.05),HN-30细胞和HN-4细胞在吉非替尼浓度为IC50,、氯喹浓度为50μg/ml时,联合治疗后细胞增殖抑制情况的差异没有统计学意义(P>0.05),当氯喹浓度低于25μg/ml时,两种细胞的增殖抑制率有统计学意义(P<0.05)。对于HN-30细胞,载吉非替尼微泡-脂质体模型+载氯喹微泡-脂质体模型+超声(MB-GE-Lipo+MB-CQ-Lipo,with US)组与PBS+超声组相比差异有统计学意义(P<0.05),且载吉非替尼微泡-脂质体模型+载氯喹微泡-脂质体模型+超声(MB-GE-Lipo+MB-CQ-Lipo,with US)组与载吉非替尼微泡-脂质体模型+载氯喹微泡-脂质体模型(MB-GE-Lipo+MB-CQ-Lipo)组相比差异有统计学意义(P<0.05)。载吉非替尼微泡-脂质体模型+载氯喹微泡-脂质体模型+超声(MB-GE-Lipo+MB-CQ-Lipo,with US)组与载吉非替尼微泡-脂质体模型+超声(MB-GE-Lipo)组相比,差异没有统计学意义(P﹥0.05)。结论当EPC:Chol=5:1时,载吉非替尼脂质体封率较高,且胆固醇比例合适,脂质体较稳定。脂质体与微泡可以通过生物素-亲和素连接。相较于Cal-27细胞和HN-4细胞,HN-30细胞对吉非替尼和氯喹的联合治疗更为敏感,载吉非替尼微泡-脂质体模型+载氯喹微泡-脂质体模型(有超声)(MB-GE-Lipo+MB-CQ-Lipo,with US)组对肿瘤增殖抑制作用明显。