乳酸菌对肉鸡肠道中肠炎沙门氏菌的抑菌作用研究

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沙门氏菌是引起人类食源性细菌中毒的最主要的一类致病菌。刚孵化的肉仔鸡易受到沙门氏菌的感染。沙门氏菌感染导致肉鸡呈无临床症状的感染状态,使沙门氏菌持续定植在肉鸡肠道中,在肉鸡屠宰加工过程易污染肉制品,再通过食物链危害到人类健康。因此,降低沙门氏菌在肉鸡肠道内的定植对鸡肉加工安全和人类健康均具有重要意义。乳酸菌(LAB)能有效降低胃肠道致病菌的定植和感染。本研究拟在体外筛选出抑制肠炎沙门氏菌生长的乳酸菌株,以此为基础研究其对肉鸡盲肠中沙门氏菌定植的影响。试验一乳酸菌对肠炎沙门氏菌的体外抑菌作用研究。通过平板抑菌试验从本实验室菌库中筛选出12株具有不同抑制肠炎沙门氏菌生长效果的乳酸菌。结果显示乳酸菌的抑菌能力存在菌株差异性,抑菌圈大小从73±7.3mm2到339±15.3mm2不等。其中抑菌效果最好的3株乳酸菌是唾液乳酸杆菌J41(339±15.3mm2)、唾液乳酸杆菌J21(329±1.2mm2)和唾液乳酸杆菌JM14(307±3.0mm2)。抑菌效果最差菌株是粪肠球菌C53(75±2.0mm2)和唾液乳酸杆菌J52(73±7.3mm2)。通过体外竞争黏附试验研究乳酸菌对肠炎沙门氏菌黏附上皮细胞的影响。在排斥试验中,10株乳酸菌抑制了肠炎沙门氏菌对Caco-2细胞的黏附(P <0.05),肠炎沙门氏菌的黏附率从0.1%到45.7%不等,其中唾液乳酸杆菌LSJ41抑制效果最好,乳酸片球菌PAC252效果最差。在竞争试验中,有6株乳酸菌降低了肠炎沙门氏菌对上皮细胞的黏附(P <0.05),分别是唾液乳酸杆菌LSJ41、LSJ21和LSJM14,植物乳酸杆菌LPZ01和LPJ113,粪肠球菌EFC61(P <0.05)。在置换试验中,与只加入肠炎沙门氏菌比较,乳酸菌LSJ21、LSJM14、LPJ113、EFC61和LSJ52显著降低了沙门氏菌的黏附率(P <0.05)。结果表明:乳酸菌能显著抑制肠炎沙门氏菌黏附到上皮细胞,抑制效果存在菌株差异性;乳酸菌株抗黏附效果依赖处理时间;预选处理乳酸菌有利于抑制肠炎沙门氏菌的黏附。试验二乳酸菌对肠炎沙门氏菌在肉鸡盲肠定植的影响。224只AA肉鸡随机分成8个处理组:阴性对照组(饲喂基础日粮,不进行沙门氏菌感染)、阳性对照组(饲喂无抗生素基础日粮,并进行沙门氏菌感染)、唾液乳杆菌J52组、乳酸片球菌C252组、粪肠球菌M23组、植物乳杆菌J113组、植物乳杆菌Z01组和唾液乳杆菌JM14组(6株乳酸菌的添加剂量均为109cfu/kg日粮,并进行沙门氏菌感染)。乳酸菌通过发酵冻干,制成菌粉添加到基础日粮中。每个处理4个重复,每个重复7只鸡。在第5日龄,阴性对照组口腔灌服200μL PBS作为对照,阳性对照组合乳酸菌处理组口腔灌服200μL肠炎沙门氏菌感染。感染后第1、3和5天进行样品采集分析。结果显示:感染后第1天,与阳性对照组相比,所有乳酸菌处理都显著降低了沙门氏菌的在肉鸡盲肠中的定植(P <0.05);感染后第3天,4株乳酸菌(唾液乳杆菌J52、乳酸片球菌C252、植物乳杆菌Z01和唾液乳杆菌JM14)著降低了沙门氏菌的在肉鸡盲肠中的定植(P <0.05);感染后第6天,除粪肠球菌EFM23组,其他所有乳酸菌处理组都显著降低了沙门氏菌在肉鸡盲肠的定植(P <0.05)。结果表明,在体外具有高抑菌效果和抗黏附能力的乳酸菌可以减少肠炎沙门氏菌在肉仔鸡盲肠中的定植。
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