【摘 要】
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葡萄病毒病严重影响其产量和品质,并可由多种病毒侵染所致,为明确新疆天山北麓酿酒葡萄主产区病毒病发生情况,采用五点采样法采集石河子垦区‘赤霞珠’、‘霞多丽’、‘贵人香’、‘梅鹿辄’、‘西拉’和‘雷司令’6个主栽酿酒葡萄品种样品310份,开展12种葡萄病毒及5种类病毒的检测,结果如下:1、通过特异引物GGVA-1-F/GGVA-440-R、GGVA-440-F/GGVA-1678-R、GGVA-167
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葡萄病毒病严重影响其产量和品质,并可由多种病毒侵染所致,为明确新疆天山北麓酿酒葡萄主产区病毒病发生情况,采用五点采样法采集石河子垦区‘赤霞珠’、‘霞多丽’、‘贵人香’、‘梅鹿辄’、‘西拉’和‘雷司令’6个主栽酿酒葡萄品种样品310份,开展12种葡萄病毒及5种类病毒的检测,结果如下:1、通过特异引物GGVA-1-F/GGVA-440-R、GGVA-440-F/GGVA-1678-R、GGVA-1678-F/GGVA-1-R进行PCR扩增及克隆测序,获得xj01分离物基因组全长2904 bp,通过BLAST表明xj01分离物与葡萄双生病毒（GGVA）分离物2019YM3（MT344713）序列相似性达99.48%,确定该分离物为GGVA;通过特异引物GINV-F/GINV-R、GFab V-F/GFab V-R、GFKV-F/GFKV-R进行RT-PCR及克隆测序,获得PT-MLZ-26、PT-CXZ-95、PT-XDL3-3分离物基因组片段分别为585 bp、1034 bp、682 bp,通过BLAST表明,3个分离物分别与葡萄浆果内坏死病毒（GINV）分离物NX-Ca S-5（KU248003）、葡萄蚕豆萎蔫病毒（GFab V）分离物LN CXZ（MZ327143）、葡萄斑点病毒（GFKV）分离物V429k（MZ091484）序列相似性为99.32%、89.75%、98.93%,确定这3个分离物分别为GINV、GFab V、GFKV;通过特异引物GYSVd1-F/GYSVd1-R进行RT-PCR及克隆测序,获得PT-CXZ-100分离物基因组全长361 bp,通过BLAST表明,该分离物与葡萄黄斑类病毒（GYSVd1）分离物UDSV1-4（MF576400）序列相似性为99.73%,确定该分离物为GYSVd1。2、对6个主栽酿酒葡萄品种310份样品进行病毒和类病毒检测,共检测到4种病毒,分别是GINV、GFab V、GFKV、GGVA,其中‘梅鹿辄’、‘贵人香’、‘霞多丽’、‘赤霞珠’携带病毒种类均为3种,检出率分别为37.04%、30.00%、29.63%、24.49%;‘西拉’和‘雷司令’携带病毒种类均为2种,检出率分别为13.73%和3.85%;6个品种均可检测到GYSVd1,检出率分别为31.48%、28.00%、51.85%、40.81%、35.29%和32.69%;6个品种均可被病毒和类病毒的复合侵染。3、310份葡萄样品中有84份检测到病毒,检出率为27.10%,所有样品中均未检测到GFLV、GVA、GPGV、GVB、GRs Pa V、GLRa V-3、GLRa V-7、GLRa V-13;310份葡萄样品有114份可检测到GYSVd1,检出率为36.77%,所有样品中均未检测到GYSVd2、HSVd、AGVd和CEVd;310份葡萄样品中有9份可同时检测到多种病毒,复合侵染率为2.90%;310份葡萄样品中32份可同时检测到病毒和类病毒,复合侵染率达10.32%,其中GINV+GYSVd1组合检出率最高,复合侵染率为2.90%。4、通过对退火温度、延伸时间、循环数、引物浓度4个条件的优化,建立了GINV-GFab V、GINV-GFKV-GYSVd1、GFab V-GFKV-GYSVd1多重RT-PCR检测体系,并对其进行特异性、灵敏性和田间样品检测验证。
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