本试验以仔猪不同组织和猪肠上皮细胞系IPEC-J2为研究对象,利用生物信息学对猪NLRP9蛋白的结构、理化性质以及相互作用蛋白进行分析预测;利用实时荧光定量PCR、免疫印迹、免疫组化和免疫荧光等试验方法研究NLRP9蛋白在仔猪11种不同组织以及肠上皮细胞系IPEC-J2中的表达与定位;采用RNA干扰与添加脂多糖等试验方法研究NLRP9基因在肠上皮细胞IPEC-J2中的功能。结果如下:在NCBI数据库中获得猪NLRP9基因和蛋白序列并进行生物信息学分析。结果表明,NLRP9基因定位在6号染色体上,编码996个氨基酸,分子量113.8 KDa,理论等电点为5.56,分子式为C5113H8038N1316O1476S703。该蛋白无信号肽和跨膜区域,其二级结构包括55.72%的α-螺旋结构、8.94%的β-转角、19.68%的无规卷曲和25.66%的延伸链。保守结构域为PYRIN、NACHT与LRR,进一步分析显示NRLP9蛋白可能与NLRC4和CSRNP1蛋白存在相互作用关系。利用RT-PCR、qRT-PCR、免疫印迹、免疫组化和免疫荧光研究了 NLRP9蛋白在仔猪不同组织中的表达和定位。结果表明,NLRP9mRNA及其蛋白在选取的11种组织中均有表达,利用免疫组化以及免疫荧光技术进一步分析NLRP9在猪小肠、卵巢和睾丸中的定位,结果显示NLRP9蛋白主要定位在小肠上皮细胞,卵巢卵母细胞和颗粒细胞以及睾丸间质细胞。荧光定量PCR和免疫印迹分析表明NLRP9 mRNA及其蛋白在猪肠上皮细胞系IPEC-J2中均能检测到表达。免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术进一步证实该蛋白主要定位在IPEC-J2的细胞质。利用RNA干扰技术沉默NLRP9基因并用MTT法检测细胞活性,结果发现IPEC-J2细胞活性并未受太大影响,但细胞生长速度变慢。再用不同浓度的LPS处理细胞并在体外培养12小时,检测到NLRP9mRNA和蛋白在IPEC-J2细胞中的表达量会随着LPS浓度的增加而增多,细胞活性也明显增强。