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目的肝纤维化（HF）是慢性肝病共有的病理改变,肝纤维化的进一步发展,可形成肝硬化,严重影响患者的健康与生命。肝星状细胞（HSC）在肝纤维化过程中起核心作用。转化生长因子β1（TGFβ1）是强有力的致纤维化的细胞因子,促进HSC增殖活化,合成大量ECM,在纤维化进程中起重要作用。白介素-10（IL-10）是一种炎症抑制因子,临床和动物实验表明,IL-10可减轻肝脏炎症,抑制肝纤维化的发展,可望发展为抗肝纤维化药物,但其作用机制尚未明确。本研究通过用IL-10及TGFβ1单独和共同干预体外培养的大鼠肝星状细胞系γ-HSC99,采用半定量RT-PCR法检测各组结缔组织生长因子（CTGF）及基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）mRNA表达,用免疫细胞化学染色法观察HSC表达α-平滑肌激动蛋白（α-SMA）的变化,进一步探讨IL-10抗肝纤维化的作用机制。材料与方法一、实验材料1、γ-HSC99细胞系为活化的大鼠肝脏星状细胞。2、实验试剂TGFβ1及重组大鼠IL-10;逆转录试剂盒;Taq酶;引物;DMEM培养基;α-SMA一抗;SP试剂盒;DAB显色系统。二、细胞培养将γ-HSC99细胞复苏后接种于25cm2培养瓶中,每瓶加入5ml含10%胎牛血清的DMEM培养液,置37℃、5%恒温CO2培养箱中,每1-2天以0.25%胰蛋白酶消化传代。三、RT-PCR法检测CTGF及TIMP-1 mRNA的表达用不同浓度的IL-10（10、20、40ug/L）与TGFβ1（8ug/L）单独和共同干预HSC 24、48、72h后,用Trizol试剂提取细胞总RNA,用分光光度法测定RNA含量及纯度。用RNA PCR试剂盒进行逆转录聚合酶链式反应,RT-PCR产物在1.2%琼脂糖凝胶上电泳（100V,30 min）,用GDS凝胶成像系统拍摄电泳结果,各带用计算机图像分析系统扫描定量。四、免疫细胞化学法检测α-SMA的表达用IL-10（20ug/L）与TGFβ1（8ug/L）单独和共同干预HSC 24h后,采用免疫细胞化学染色法检测α-SMA的表达,在光镜下观察细胞爬片α-SMA的染色,应用图象分析仪器定性分析α-SMA的表达情况。五、统计学分析数据以均数±标准差表示,各组之间是否存在显著性差异分析采用One-wayANOVA分析,LSD-t检验。以P＜0.05确定差异有无显著意义。结果1、半定量RT-PCR法检测结果产物经凝胶电泳可见分别于383 bp（CTGF）和335 bp（TIMP-1）处的清晰扩增条带。灰度分析结果显示:TGFβ1组与空白对照组（A组）比较,CTGF及TIMP-1mRNA表达均明显升高,差别有统计学意义（p＜0.05）;IL-10各浓度组（C、D、E组）与空白对照组比较,基因表达差别无明显统计学意义（p＞0.05）;同时加入TGFβ1及不同浓度的IL-10（F、G、H组）与TGFβ1组（B组）比较,CTGF及TIMP-1mRNA表达均明显降低,差别有统计学意义（p＜0.05）,并且随着IL-10浓度的升高,抑制作用越明显。2、免疫组化结果DAB显色后,有棕褐色颗粒着色的细胞为阳性细胞,TGFβ1组阳性细胞数较空白对照组明显增多且染色颜色均偏深,故α-SMA的表达有所增加,IL-10单独干预HSC细胞与空白对照组比较差异不大,而TGFβ1及IL-10共同作用HSC细胞与TGFβ1组细胞相比,阳性细胞数较少且染色颜色较浅,故α-SMA的表达减少。结论1、TGFβ1可诱导HSC进一步激活,表达α-SMA明显增多,并于基因水平显著促进HSC表达CTGF及TIMP-1 mRNA。2、IL-10单独干预,对HSC表达CTGF、TIMP-1 mRNA及α-SMA无明显影响。3、IL-10对TGFβ1诱导的HSC表达α-SMA及CTGF及TIMP-1 mRNA有明显抑制作用。