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第一部分:参附注射液通过抑制凋亡发挥复苏后心肌功能障碍的保护作用 目的:参附注射液在心肺复苏后虽然发挥着心脏保护作用,但是其对于复苏后心肌功能障碍的保护机制并不明确,我们通过这个实验来探讨参附注射液是否可以通过调节凋亡来减少复苏后的心肌功能障碍。 方法:实验用近交系五指山小型猪24头,雄性,月龄为12-14个月,体重为30±2kg,麻醉后机械通气,置入电极导线外接医用程控刺激仪,选择食道输出S1S2(300/200ms)模式,8∶1比例,步长-10ms连续电刺激,直到出现室颤。经过8分钟的室颤和2分钟的CPR,所有复苏动物被随机分为3组,每组8头:参附注射液组(SFI),肾上腺素组(NE)和生理盐水组(SA)假手术组(SHAM),也就是分别给予参附(1.0ml/kg),肾上腺素(0.02mg/Kg)和生理盐水分别中心静脉推注。分别在恢复自主循环(ROSC)后0,30,120和360分钟记录血流动力学指标和留取血样,在ROSC24小时后立即处死动物,留取心肌标本分别进行光、电镜,蛋白印迹法,实时荧光PCR法和TUNEL凋亡法的检测。 结果:同肾上腺素和生理盐水组比较,不仅参附注射液组的左心室的收缩功能和氧代谢指标都明显提高,并且参附注射液组的心肌细胞caspase-3的蛋白和mRNA表达都同时明显下调,此外,心肌细胞凋亡的数量也明显减少。 结论:Caspase-3介导的细胞凋亡机制可能是猪心肺复苏后心肌功能障碍的可能机制之一。参附注射液可以明显减少心肌细胞的损害,改善心肌细胞的超微结构,抑制Bcl-2,Bax和caspase-3的表达,从而抑制心肌细胞的凋亡。因此,参附注射液可以通过调节细胞凋亡明显的改善复苏后的心肌功能障碍。 第二部分参附注射液对T细胞特异性转录因子T-bet/GATA-3在猪复苏后心,肺功能障碍中表达的作用 目的:我们通过这个实验来探讨参附注射液是否可以通过调节T细胞特异性转录因子GATA-3和T-bet的表达失衡来减少复苏后的心肌功能障碍和肺损伤。 方法:实验用近交系五指山小型猪24头,雄性,月龄为12-14个月,体重为30±2kg,麻醉后机械通气,置入电极导线外接医用程控刺激仪,选择食道输出S1S2(300/200ms)模式,8∶1比例,步长-10ms连续电刺激,直到出现室颤。经过8分钟的室颤和2分钟的CPR,所有复苏动物被随机分为3组,每组8头:参附注射液组(SFI),肾上腺素组(NE)和生理盐水组(SA)假手术组(SHAM),也就是分别给予参附(1.0ml/kg),肾上腺素(0.02mg/Kg)和生理盐水分别中心静脉推注。分别在恢复自主循环(ROSC)后0,1/2,2,6,12,24小时留取血样,在ROSC24小时后立即处死动物,留取心肌和肺脏标本分别进行光、电镜监测,测量肺组织的湿/干重比,肺泡灌洗液中的细胞总数,多形核细胞计数;使用流式细胞仪检测CD4+和CD8+淋巴细胞亚群;使用酶联免疫吸附法检测血清,心肌细胞和肺组织的IL-4,TNF-α和IFN-γ水平;使用蛋白印迹法检测心肌细胞和肺组织的GATA-3和T-bet蛋白表达,使用实时荧光定量PCR法检测心肌细胞和肺组织的GATA-3和T-bet的mRNA水平。 结果:同肾上腺素和生理盐水组比较,参附注射液组的心肌细胞和肺组织的超微结构经历了较为轻微的损害,左心室的收缩功能,氧代谢指标和血清CD4+淋巴细胞亚群,CD4+/CD8+都明显提高,并且参附注射液还可以明显提高氧合指数,降低肺组织的干,湿重比和肺泡灌洗液中的细胞总数,多形核细胞计数。在参附治疗组中,心肌细胞的IFN-γ,TNF-α和肺组织的IL-4水平明显降低,此外,心肌细胞的GATA-3和肺组织的T-bet的蛋白表达和mRNA水平也明显上调。 结论:转录因子GATA-3和T-bet的表达失衡导致的心肌细胞和肺组织的免疫功能障碍可能参与了复苏后心肌功能障碍和肺损伤的过程。此外,参附注射液可以通过调节心肌细胞和肺组织转录因子GATA-3和T-bet的表达失衡,改善心肌细胞和肺组织的免疫功能失调,从而发挥复苏后心肌功能障碍和肺损伤的保护作用。