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第一部分 自噬抑制剂对放疗诱导后的食管癌细胞自噬表达的影响目的：研究自噬抑制剂对放疗诱导后的食管癌细胞自噬表达的影响,监测放疗诱导后的食管癌细胞中自噬体数量变化。方法：选用食管鳞癌Eca-109细胞,分为对照组、5mmol/L给药组、10mmol/L给药组、6GY组、6GY+5mmo1/L组、6GY+10mmol/L组,共6组。采用Western blot检测不同处理组自噬标志物LC3B表达水平和GFP-LC3转染食管鳞癌Eca-109细胞后监测自噬体数量变化。结果：Western blot显示照射后自噬水平升高,自噬抑制后LC3BII和LC3BII/LC3BI匕值明显下降(F=25.64,P<0.05);GFP-LC3转染食管鳞癌Eca-109细胞后,可见照射后自噬体荧光斑点明显增多,自噬抑制后自噬体明显减少(F=127.36,P<0.05)。结论：3-甲基腺嘌呤有效的抑制了放疗诱导的自噬,而且6GY+10mmo1/L组比6GY+5mmol/L组下降更明显,呈剂量依赖性。第二部分 自噬抑制剂对放疗诱导后的食管癌细胞周期和凋亡的影响目的：研究自噬抑制剂对放疗诱导后的食管癌细胞周期和凋亡的影响。方法：选用食管鳞癌Eca-109细胞,分为对照组、5mmol/L给药组、10mmol/L给药组、6GY组、6GY+5mmol/L组、6GY+10mmol/L组,共6组。采用MTT法检测不同处理组细胞活力；荧光染料Hoechst33342观察不同处理组细胞凋亡的形态学变化；流式细胞术检测不同处理组细胞周期和细胞凋亡。结果：MTT法显示6GY+10mmool/L组细胞活力明显低于6GY组(F=129.54,P<0.05)；抑制自噬后也增加了照射诱导的凋亡率和G2/M期阻滞细胞比。结论：3-甲基腺嘌呤对放疗诱导后的食管癌细胞G2/M期能有效阻滞,而且3-甲基腺嘌呤增加了放疗诱导后的食管癌细胞的凋亡,促进了细胞死亡。第三部分 自噬抑制剂对放疗诱导后的食管癌细胞放射敏感性的影响目的：研究自噬抑制剂对放疗诱导后的食管癌细胞放射敏感性的影响。方法：选用食管鳞癌Eca-109细胞,分为对照组、5mmo1/L给药组、10mmol/L给药组、6GY组、6GY+5mmol/L组、6GY+10mmol/L组,共6组。克隆形成实验检测食管鳞癌Eca-109细胞不同处理组放射敏感性,采用“多靶单击模型”拟合细胞存活曲线。结果：6GY组、6GY+5mmol/L组、6GY+10mmol/L组DO值分别为(2.75±0.26)GY、(2.19±0.18)GY和(1.6±0.05)GY。结论：3-甲基腺嘌呤增加了放疗诱导后的食管癌细胞Eca-109的放射敏感性。第四部分LKB1在放疗诱导后的食管癌细胞自噬中的作用目的：研究LKB1在放疗诱导后的食管癌细胞自噬中的作用。方法：选用食管鳞癌Eca-109细胞,分为对照组、2GY组、4GY组、6GY组,共4组,并采用Western blot检测不同处理组LKB1蛋白、P-LKB1蛋白、AMPK蛋白和P-AMPK蛋白的表达；将食管鳞癌Eca-109细胞分为两组,对照组、siRNA靶向沉默LKB1组,以6GY照射后,利用Western blot检测不同处理组P-LKB1蛋白、P-AMPK蛋白、LC3BⅡ和LC3BⅠ蛋白的表达。结果：食管鳞癌Eca-109细胞在放疗照射后,其中的LKB1蛋白和AMPK蛋白被活化(磷酸化),并且P-LKB1蛋白和P-AMPK蛋白的表达随着照射剂量增加而增加,呈剂量依赖性；siRNA靶向沉默LKB1并以6GY照射后,P-LKB1蛋白和P-AMPK蛋白的表达都下降,并且LC3BⅠ蛋白向LC3BⅡ蛋白转化减少。结论：LKB1在放疗诱导后的食管癌细胞自噬中有重要作用。第五部分 自噬抑制剂联合放疗在食管癌动物模型中的抗肿瘤作用目的：研究自噬抑制剂氯喹(CQ)联合放疗在食管癌动物模型中的抗肿瘤作用。方法：用食管鳞癌Eca-109细胞建立裸鼠食管癌移植瘤模型,分为PBS组、CQ组、6GY组、CQ+6GY组,共4组。经不同条件处理后,每周两次测量移植瘤大小,27天后移除移植瘤做为标本；利用免疫组化法和IOD法检测LC3B和P-LKB1蛋白的表达及TUNEL法检测凋亡状态。结果：裸鼠移植瘤经不同组处理后27天,分别测量PBS组移植瘤体积2089±68mm3,CQ组2033±72 mm3,6GY组1405±81mm3,CQ+6GY组239±54 mm3,同其余组相比,CQ+6GY组移植瘤体积最小(P<0.05)；IOD法检测PBS组、CQ组、6GY组、CQ+6GY组的LC3B蛋白表达分别为63.36±187、538.64±96、751.8±311、2622.98±443,同其余组相比,CQ+6GY组LC3B表达最高(P<0.05)；P-LKB1蛋白的表达分别为204.5±87、584.9±65、2630.48±327、861.41±150,同其余组相比,6GY组P-LKB1蛋白表达最高(P<0.05)；TUNEL法检测凋亡状态分别为11±4、19±2、37±6、49±15,同其余组相比,CQ+6GY组凋亡最强(P<0.05)。结论：自噬抑制剂联合放疗能有效杀伤食管癌,增加放疗的敏感性。