目的:肝癌是一种恶性程度较高的消化系统肿瘤,其治疗方式以手术为核心,但因其发病隐匿,只有少数患者就诊时可以获得手术机会。化疗为晚期肝癌治疗方式之一,但大部分患者无法承受化疗药物全身毒副作用,故限制了其临床应用。近年来研究发现超声造影剂可作为载体实现药物靶向递送,从而减少药物毒副作用。因此,本文研究制备RGD靶向载阿霉素纳米泡减少化疗副作用,增敏晚期肝癌的化疗效果。方法:(1)采用薄膜水合法制备空白磷脂纳米泡(DP)、RGD磷脂纳米泡(RDP)及RGD载DOX磷脂纳米泡(RDPD),通过透射电子显微镜及光学显微镜观察其形态,粒径检测仪检测其粒径大小、粒径分布情况及表面电位情况,利用酶标仪测量RDPD载药量及包封率,评价其载药能力。(2)检测DP纳米泡、RDP纳米泡及RDPD纳米泡体外显影效果。应用细胞计数原理检测以上纳米泡体外稳定性,并绘制体外稳定性曲线。(3)利用超声诊断仪检测其体内稳定性及测定TIC曲线,评估三种造影剂达峰强度、达峰时间及曲线下面积(AUC),并比较三种纳米泡以上指标差异。(4)利用细胞培养技术,检测DP、RDP、RDPD纳米泡体内急性毒性及细胞毒性,评价以上三种纳米泡生物安全性。(5)建立裸鼠肝癌皮下瘤模型,利用超声诊断仪评价DP、RDP及RDPD纳米泡肿瘤靶向性。采用免疫组织化学染色的方法检测正常裸鼠肝脏及皮下瘤αvβ3整合素阳性表达情况。(6)将成功建模荷瘤鼠分为5组,分别给予同等剂量生理盐水、空白纳米泡、RGD纳米泡、RGD携DOX纳米泡、DOX溶液,比较各组间给药前后肿瘤大小、超声弹性成像及组织病理差异。结果:(1)采用薄膜水合法成功制备空白磷脂纳米泡(DP)、RGD磷脂纳米泡(RDP)及RGD携DOX磷脂纳米泡(RDPD),其粒径分别为292 nm、303 nm、322 nm,其电位分别为-3.69 mv、-2.69 mv、-2.68 mv。RDPD载药量为3.02%,包封率为71%,载药能力良好。(2)DP、RDP、RDPD纳米泡均可实现体外显影,且显影效果良好。初始纳米泡浓度三组间无明显差异(P>0.05)。(3)评估DP、RDP、RDPD三种造影剂达峰强度、达峰时间及AUC曲线下面积均无明显差异(P=0.176、0.100、0.733>0.05)。体内稳定性DP与RDP、RDPD差异有统计学意义(P=0.046、0.038<0.05)。(4)DP与RDP不具有细胞毒性,而DOX溶液与RDPD具有细胞毒性。DOX溶液组与RDPD组细胞毒性差异有统计学意义(P<0.001)。DP与RDP无明显体内毒性,DOX溶液与RDPD均有体内毒性。RDPD组体内毒性与DOX差异有统计学意义(P=0.0493<0.05)。病理表现可见DOX组具有心脏毒性,其余各组病理表现均正常。(5)RDP及RDPD组空化前后db值差异有统计学意义(P=0.007、0.004<0.05),RDP、RDPD组空化前后db值差值与DP组差异有统计学意义(P=0.032、0.008<0.05)。免疫组化结果表明肿瘤组织αvβ3表达阳性,而肝脏组织表达极低。(6)RDPD组与DOX组肿瘤体积变化较空白组差异有统计学意义(P<0.001),RDPD组较DOX组肿瘤体积变化差异有统计学意义(P=0.008<0.05)。RDPD组与DOX组瘤体硬度较空白组差异有统计学意义(P=0.001、0.002<0.05),RDPD组较DOX组瘤体硬度差异有统计学意义(P=0.011<0.05)。各组瘤体病理结果显示:RDPD组肿瘤坏死最为明显,DOX组可见部分坏死,RDP组可见极少坏死,DP组与空白对照组未见明显坏死区域。结论:1、采用薄膜水合法可制备空白磷脂纳米泡、RGD靶向纳米泡及RGD携载DOX纳米泡,其粒径分布均匀,体内外稳定性、成像效果均较好,载药量与包封率尚佳。空白纳米泡及RGD纳米泡不具有体内毒性及细胞毒性,但RGD载DOX纳米泡具有细胞毒性。相比于DOX溶液,RDPD体内毒性较低,可实现化疗药物体内减毒。2、肝癌新生血管avβ3受体表达程度较高,而正常肝脏组织avβ3受体表达极低。携RGD肽纳米泡载体具有肝癌靶向性,可靶向肝癌新生血管,结合UTMD技术,可实现化疗药物靶向释放,从而提高肿瘤局部血药浓度。起到增敏晚期肝癌化疗效果的作用。但本实验未对其机制进行研究,故后期仍需进一步探索。