基于PI3K/AKt通路探讨复方五凤草液干预结核性溃疡的作用机制

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目的:1.观察复方五凤草液外治结核性溃疡的临床效果;2.以PI3K/AKt通路为切入点,结合巨噬细胞极化理论,从分子水平初步探讨复方五凤草液干预结核性溃疡可能的作用机制。方法:将76例纳入研究的患者随机分为试验组(复方五凤草液组)和对照组(康复新液组)两组,每组各38例。所有患者均以规范抗结核治疗为基础,对照组以中成药康复新液进行局部换药处理,试验组予以院内协定方复方五凤草液外治。观察时间为28天,以治疗前及治疗后第7、14、21、28天作为时间节点,观察各个时间节点创面愈合率、创面腐去时间、上皮生长时间、中医证候积分的变化,定期监测血常规、肝肾功能,于各时间节点采集患者血液及创面组织样本,观察在不同治疗阶段PI3K、AKt、MDM2、p53、TNF-α、VEGF的表达水平。结果:1.试验组和对照组在治疗第21天起,愈合趋势明显,治疗后第21、28天的创面愈合率远超治疗后第7天(P<0.05);组间比较,试验组在28天创面愈合率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2.与康复新液组相比,复方五凤草液组能明显提高创面愈合率、缩短创面腐去时间与上皮生长时间,在改善中医证候积分方面,均成效显著,差异有统计学意义(P<0.05)。3.ELISA检测两组血浆中PI3K、AKt、MDM2、p53、TNF-α、VEGF的蛋白表达水平:治疗过程中TNF-α、p53呈现递减趋势,PI3K、AKt、MDM2、VEGF呈递增趋势;治疗后第21天起,六项指标开始显著变化;治疗后期,同一时间点,试验组与对照组相比,试验组更有效提高PI3K、AKt、MDM2、VEGF蛋白表达水平,降低了 TNF-α、p53蛋白表达水平,差异显著(P<0.05)。4.qPCR 检测两组创面组织中 PI3K、AKt、MDM2、p53、TNF-α、VEGF mRNA 表达水平:PI3K、AKt表达整体为上升趋势,但在治疗过程中,治疗后第21天表达量低于第14天,而后表达再次提高,且高于治疗前;MDM2、VEGF呈现递增趋势,TNF-α、p53呈现递减趋势,且于治疗后第14天起六项指标开始显著变化;治疗后期,同一时间点,试验组与对照组相比,试验组更有效提高PI3K、AKt、MDM2、VEGF mRNA表达水平,降低了 TNF-α、p53 mRNA表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。5.Western Blot法检测两组创面组织中PI3K、AKt、MDM2、p53、TNF-α、VEGF蛋白表达情况,治疗后PI3K、AKt、MDM2、VEGF蛋白水平升高、TNF-α、p53蛋白水平降低。结论:1.复方五凤草液显著促进结核性创面愈合,具有高效、安全等特点,临床疗效值得肯定。2.复方五凤草液通过下调TNF-α、p53的水平,上调PI3K、AKt、MDM2、VEGF的水平,抑制M1型巨噬细胞极化——抑制炎症反应,并促进向M2型极化——促进肉芽组织新生,泄毒生新,起到推进结核性创面愈合的作用。3.PI3K/AKt通路通过调控巨噬细胞极化在一定程度上参与了结核性溃疡的创面进展,上述相关因子在患者体内的动态表达,反映了复方五凤草液治疗结核性溃疡的过程,对疗效评判有借鉴意义,值得更多角度去探讨可能存在的机理。
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