黄褐斑等色素沉着性皮肤病多见于东方中、青年女性，它不仅影响容貌，还给患者带来诸多心理、生活方面的烦恼和痛苦。然而其发病机理尚不完全清楚，亦缺乏有效的治疗方法。研究证实，黑素细胞的功能缺陷和酪氨酸酶活性改变与黄褐斑的发病密切相关。因此研究黑素细胞及酪氨酸酶功能，是探索这些疾病的发病机理和筛选有效治疗药物的重要手段。体外培养的黑素细胞保持了体内黑素细胞分化的标记-黑素合成，所以我们成功地培养了人正常黑素细胞，并以此为模型，观察了不同浓度山柰素对异丁基甲基黄嘌呤干预的黑素细胞的增殖、黑素合成及其酪氨酸酶活性的影响。进而验证山柰素是否是通过对黑素细胞信号转导途径中的环磷酸腺苷/蛋白激酶A来起作用的，并对比了其与熊果苷作用的不同，为探讨黄褐斑等色素沉着性皮肤病的发病机理及药物作用的分子机制提供了新的理论依据。 第一部分人正常黑素细胞的体外培养 目的：学习人正常黑素细胞的原代培养技术，并为进一步的研究提供实验模型。方法：1、利用包皮环切术后的包皮，分离培养人正常黑素细胞。2、采用左旋多巴染色法进行细胞鉴定。结果：成功培养、传代、纯化了人正常黑素细胞，并经左旋多巴染色证实。结论：动态观察了人正常黑素细胞培养的全过程，验证了细胞的特性，获得了大量纯化的黑素细胞，为进一步的细胞内干预实验准备了物质基础。 第二部分山柰素对人正常黑素细胞黑素生成的调节及相关信号转导的研究 目的：以培养的人正常黑色素细胞为模型，利用蛋白激酶A激活剂异丁基甲基黄嘌呤干预细胞，研究不同浓度山柰素抑制黑素细胞酪氨酸酶活性的分子机制，并为探索黄褐斑等色素沉着性皮肤病的发病机制以及筛选治疗药物提供理论依据。方法：1、培养人正常黑素细胞。2、异丁基甲基黄嘌呤干预黑素细胞。3、山柰素、熊果苷干预黑素细胞。4、利用酶标仪测定干预后的黑素细胞酪氨酸酶活性、黑素含量及黑素细胞的增殖的变化。结果：1、山柰素对黑素细胞酪氨酸酶活性、黑素含量有明显抑制作用，与阳性、阴性及空白对照组比较，均有显著性差异。2、山柰素对黑素细胞有促增殖的作用，与阳性、阴性及空白对照组比较，有显著性差异。3、异丁基甲基黄嘌呤与山柰素联合处理细胞，与单独加入山柰素组对黑素含量及酪氨酸酶活性比较有显著性差异。4、在山柰素与异丁基甲基黄嘌呤联合作用48h后，发现细胞树突由多极向两极转化趋势明显。结论：1、山柰素对黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素含量的抑制作用优于熊果苷，并对黑素细胞的增殖无负面影响，由此我们认为山柰素是一种有良好应用前景的酪氨酸酶抑制剂。2、山柰素通过环磷酸腺苷/蛋白激酶A信号转导途径抑制黑素细胞酪氨酸酶的活性。