原发型家族性大脑钙化(Primary Familial Brian Calcification,PFBC)是一种家族性遗传的常染色体神经变性病,以两侧对称性基底节钙化为最常见特征,故又称之为特发性基底节钙化(IdiopathicBasalGangliaCalcification,IBGC),钙化亦可发生在大脑尾状核、豆状核、齿状核、和脑丘等处。患者发病多在30-60岁之间,临床表现以肌张力障碍、多发性性手足抽搐、认知紊乱、舞蹈病、手足徐动或帕金森病样表现等特征。该病目前已知有四个致病基因分别是SLC20A2、PDGFB、PDGFRB 以及 XPR1。XPR1是最近发现的一个PFBC的致病基因。它最早是作为编码小鼠异嗜性白血病病毒受体被发现的,进一步的研究发现其具有将无机磷转运出细胞的功能,是已知的唯一的具备此功能的基因。根据蛋白结构,XP1编码一个有8个跨膜区的跨膜蛋白,有一个保守的SPX结构域和一个EXS结构域。XPR1基因突变导致的PFBC患者中有相当大一部分位于SPX结构域,其功能是磷转运。而EXS结构域负责磷酸盐浓度感知。XPR1在黑腹果蝇体内的同源基因为CG10483,位于果蝇三号染色体,与人类XPR1具有高同源性。由于前期研究中制备的dXPR1抗体仅能用于免疫印迹实验,免疫染色中其北京较高,所以为了观察确定dXPR1在果蝇体能的定位,我们拟构建内源表达dXPR1-GFP的果蝇,以用于该蛋白定位及功能的研究。本实验以黑腹果蝇为实验材料,利用携带CG10483sgRNA的果蝇和生殖腺特异表达Cas9酶的品系杂交,在它们所产的卵中显微注射带有HDR(homology-directed repair,HDR)供体的载体,这样在 CG10483 sgRNA 引导Cas9内切酶切割CG10483基因靶位点的同时完成同源重组修复,能将外源的GFP序列连接到CG10483基因的3’端。通过遗传学筛选,我们成功得到了表达dXPR1-GFP融合蛋白的果蝇。并且通过直接观察和免疫染色观察到了该融合蛋白在三龄幼虫大脑上的分布,发现该蛋白在果蝇三龄幼虫中主要分布于中枢神经系统的蘑菇体和腹神经节。这对今后CG10483的定位及功能研究提供有利条件。