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AUF1(AU-rich element binding factor1)是参与前体mRNA剪接加工、成熟mRNA转运和降解等过程相关的RNA结合蛋白，主要功能是调节带有ARE(AU-rich element)元件mRNA的翻新，近年来发现AUF1能与双链DNA结合，在转录水平调控基因的表达。前期研究我们报道了AUF1蛋白通过与甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)基因5端调控区特异的DNA序列结合，调节AFP基因的转录。AFP是重要的肿瘤和内胚层细胞分化标志物，AUF1调控AFP基因转录表明AUF1与细胞癌变和分化密切相关，因此进一步研究AUF1十分重要。本文以小鼠畸胎瘤干细胞F9为模型，检测分析AUF1蛋白在细胞分化过程中的表达，并从F9细胞中克隆了AUF1基因的编码片段，为深入研究AUF1蛋白功能奠定基础。主要研究结果如下: (1) F9细胞分化模型建立及AUF1基因表达 在50nM维甲酸(retinoic acid，RA)的诱导下，F9细胞团边缘从第2天开始出现皱褶，并随着时间的增加皱褶越来越明显，对于没有RA处理的F9细胞，其表面始终保持光滑状态。RT-PCR检测结果显示，分化标志物AFP和Ker18的mRNA从RA诱导第2天起表达逐渐升高，而在没有RA处理的F9细胞中AFP和Ker18不表达，上述结果从细胞形态和分化标志物基因表达改变验证了F9细胞在RA处理后发生了分化。Western blot结果表明，p45AUF1、p42AUF1、p40AUF1和p37AUF1异构体在有RA和没有RA处理的F9细胞中始终存在，而p30AUF1异构体仅在RA处理的F9细胞中存在且含量远低于其它异构体，表明p30AUF1异构体蛋白与细胞分化相关。 (2) AUF1基因编码序列的克隆及分析 以RA诱导的F9细胞RNA为模板，RT-PCR特异性扩增AUF1基因片段，连接pGEM-T质粒，转化E.coli DH5α，筛选重组质粒。经过DNA测序得到重组质粒中插入的AUF1-X片段全部序列，此片段全长864bp，互联网比对分析结果表明，除缺少5端182bp的cDNA外，AUF1-X片段与p42AUF1异构体基因的编码序列完全一致，这是首次从F9细胞中克隆得到AUF1基因的编码片段，为下一步构建各种AUF1异构体基因表达载体，深入研究AUF1蛋白功能奠定基础。 (3) AUF1蛋白在小鼠中的组织分布 Western blot结果表明，AUF1蛋白在小鼠外周血、肝、肾、脑、胸腺和脾脏组织中均有分布，且在同一组织中AUF1各异构体蛋白相对表达量不相同。外周血中检测不到p45AUF1、p42AUF1、p40AUF1和p37AUF1异构体，但p30AUF1异构体蛋白含量相对较高，其机制有待研究。