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内毒素,也被称作脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）,是革兰氏阴性菌细胞壁特有的组成成分,也是其致病的主要因素。内毒素通过肝门静脉系统进入肝脏,被枯否氏细胞吞噬,当进入肝脏的内毒素过多时,肝脏会发生损伤。肝脏是机体最重要的解毒器官,鸡的肝损伤是家禽养殖中的主要问题之一,给养禽业造成了重大经济损失。二氢杨梅素（Dihydromyricetin,DHM）作为一种类黄酮化合物,具有多种药理活性,包括抗炎、抗氧化、肝脏保护和脂质调节等,在畜牧业发展中拥有广阔的应用前景。本试验以鸡原代肝细胞和海兰白雏鸡为研究对象,研究DHM对LPS诱导鸡肝损伤的保护作用,为DHM在兽医临床上的广泛应用提供理论基础和科学依据。本研究首先通过分离培养获得鸡原代肝细胞,将其分为6组,即对照组、模型组(LPS浓度为40μg·m L-1)、DHM组（20、40、80μM DHM）和DHM对照组（80μM DHM）。原代肝细胞融合率达80%时,DHM组和DHM对照组细胞给予相应浓度的DHM孵育2 h,模型组和DHM组给予40μg·m L-1 LPS,12 h后收集细胞和细胞上清液,应用试剂盒检测上清液中ALT、AST和LDH活性变化及细胞抗氧化指标（T-AOC、CAT、NO、LPO）的水平,RT-PCR法检测细胞中炎症因子（IL-6、TNF-α、IL-12、i NOS）m RNA的表达。将7日龄雏鸡分为6组,即对照组、模型组(LPS剂量为60 mg·kg-1)、DHM组（0.025%、0.05%、0.1%DHM）和DHM对照组（0.1%DHM）。DHM组和DHM对照组雏鸡饲喂添加相应剂量DHM的饲料,对照组和模型组饲喂正常饲料,连续饲喂14 d。模型组和DHM组腹腔注射LPS,对照组和DHM对照组腹腔注射等量的生理盐水,12 h后收集血液和肝脏组织,检测血清中ALT、AST和LDH的活性及肝脏中氧化指标（T-AOC、CAT、NO、LPO）的水平,RT-PCR法检测雏鸡肝脏中炎症因子（IL-6、TNF-α、IL-12、i NOS）m RNA的表达,并制作石蜡切片,对肝脏进行病理组织学检查。试验结果如下:（1）DHM对LPS诱导鸡原代肝细胞损伤的保护作用:给予LPS 12 h后,与对照组相比,40、60、80、100μg·m L-1组LDH的活性均极显著升高（P<0.01）,因此选用40μg·m L-1 LPS应用于后续的细胞试验。MTT试验结果表明,用不同浓度的DHM处理鸡原代肝细胞12 h后,80、160、320、640、1280μM的DHM组,细胞活性极显著上升（P<0.01）,不同浓度二氢杨梅素处理细胞24 h和48 h后,1280μM的DHM组细胞活力极显著升高（P<0.01）,以上结果表明二氢杨梅素对鸡原代肝细胞没有细胞毒性。与对照组相比,模型组细胞上清液中AST、ALT和LDH的活性极显著升高（P<0.01）;与模型组相比,40μM DHM组细胞上清液中AST、ALT和LDH的活性极显著降低（P<0.01）,结果说明40μM DHM减轻了LPS造成的肝细胞损伤。与对照组相比,模型组细胞中CAT的活性及T-AOC的水平极显著降低（P<0.01）,LPO与NO的含量极显著升高（P<0.01）;相比于模型组,40μM DHM组CAT的活性和T-AOC的水平极显著升高（P<0.01）;40μM DHM组NO和LPO的含量极显著降低（P<0.01）,结果证明40μM DHM可以明显提高细胞的抗氧化能力。与对照组相比,模型组细胞中TNF-α,IL-6,IL-12和i NOS m RNA的表达均极显著升高（P<0.01）;相比于模型组,40μM DHM组TNF-α、IL-6、IL-12和i NOS m RNA的表达均极显著降低（P<0.01）,结果表明40μM和80μM DHM可以通过调节炎症因子的表达来提高细胞的抗炎能力。（2）DHM对LPS诱导雏鸡肝损伤的保护作用:腹腔注射LPS剂量60 mg·kg-1后,雏鸡血清中ALT、AST和LDH活性极显著升高（P<0.01）,因此选用该剂量的LPS用于内毒素诱导雏鸡肝损伤模型的复制。与对照组相比,腹腔注射LPS后雏鸡血清中AST、ALT和LDH的活性极显著升高（P<0.01）;0.05%DHM组雏鸡血清中ALT、AST和LDH的活性极显著降低（P<0.01）,结果表明0.05%DHM降低了血清中转氨酶和乳酸脱氢酶的活性,减轻LPS所致的雏鸡肝损伤。与对照组相比,模型组CAT的活性和T-AOC的水平极显著降低（P<0.01）,LPO和NO的含量极显著升高（P<0.01）;与模型组相比,0.05%DHM组肝脏中CAT的活性和T-AOC的水平极显著升高（P<0.01）,LPO和NO的含量极显著降低（P<0.01）,说明DHM可以通过提高肝脏中抗氧化酶的活性,减少过氧化产物的含量来提高雏鸡抗氧化能力。与对照组相比,模型组TNF-α、IL-6、IL-12和i NOS的m RNA表达均极显著升高（P<0.01）;与模型组相比,0.05%DHM组TNF-α、IL-6、IL-12和i NOS的m RNA均极显著降低（P<0.01）,结果表明0.05%DHM可以降低LPS所致的炎症因子的升高,说明二氢杨梅素对肝脏中的炎症因子的表达有调节作用。病理组织学结果显示对照组肝脏结构完整,肝小叶结构清晰,细胞形态正常;模型组肝脏组织中肝索结构紊乱,细胞肿胀,肝索间隙变大并且有炎性细胞浸润;相比于模型组,0.025%DHM组肝细胞肿胀程度减小,炎性细胞浸润;给予0.05%和0.1%DHM后,雏鸡肝脏中肝小叶结构趋于正常,炎性细胞浸润减少,DHM减轻了LPS所致的雏鸡肝损伤。本研究成功复制了LPS所致的鸡原代肝细胞损伤模型和雏鸡肝损伤模型,明确DHM可以通过调节肝细胞和肝脏中IL-6、TNF-α、IL-12和i NOS m RNA的表达,增强T-AOC、CAT的水平,降低NO和LPO的含量,增强肝细胞和肝脏的抗氧化能力和抗炎能力,减轻LPS诱导的肝细胞损伤和雏鸡肝损伤。因此,二氢杨梅素可以通过调节抗氧化能力和抗炎能力来干预LPS诱导的鸡肝损伤。