内蒙古伊金霍洛地区主要虫媒的种型鉴定及虫媒病检测方法的建立

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如今生态系统处在不断的变化中,部分地区小气候也不断变化,交通方式、物流方式不断的发展,为媒介生物滋生繁殖、分布、传播疾病提供了便利条件。其中一个突出的特点为一些原有已经消失的虫媒病再度暴发,新的虫媒性疾病不断涌现。由虻、蚊等吸血昆虫传播的如马传染性贫血、伊氏锥虫病、登革热、日本乙型脑炎等虫媒病,近10余年来均明显回升,全球约有25亿人受到威胁。由蜱虫叮咬传播的马梨形虫病(包括泰勒虫、驽巴贝斯虫、马巴贝斯虫等),目前已在世界五大洲70多个国家均有报道。内蒙古地区适于饲养马、牛、羊等各种牲畜,是我国著名的天然牧场,也是我国重要的畜牧业基地,人与牲畜关系密切。在部分地区优先建设无疫区项目,对有效防控常见虫媒病的发病流行具有重要意义。为了解内蒙古伊金霍洛地区主要蚊、虻及蜱虫的种类以及携带的病原体种类等情况,本研究在内蒙古伊金霍洛地区选取不同的地点对孳生的蚊子进行自由采集,以及不同马场马匹体表进行蜱虫和虻虫的采集,应用传统形态学和分子生物学进行种型鉴定,并对这些昆虫体内进行相关病原体(如乙型脑炎和马巴贝斯虫)的检测。方法:在2019-2020年间,对伊金霍洛地区8个采样地点采集了9000只蚊虫样品和从不同马匹体表采集400只蜱虫和296只虻虫。采用传统形态学方法,通过解剖显微镜观察所采集样品虫体形态特征初步进行鉴定。在此基础上,采用PCR方法对蚊虫、蜱虫、虻虫的COⅠ基因及蜱虫的ITS2基因序列进行扩增并序列分析,应用Mega6.06生物学软件绘制出遗传进化树。在相继工作中,提取蚊虫的总RNA和蜱虫的DNA,根据对比乙型脑炎四种基因型及马巴贝斯虫16Sr RNA基因设计特异性引物和探针,建立高特异性和敏感性的Taqman实时荧光定量PCR方法,对所有野外采集的蚊虫和蜱虫RNA和DNA样品中检测乙型脑炎病毒和马巴贝斯虫特异性的基因。结果:通过显微镜观察蚊虫(口器、翅膀、背部、足)、蜱虫(假头基、缘垛、盾板)和虻虫(头部、胸部、腹部)的形态学特征和系统发育树中可得知,采集到的蚊字属于凶小库蚊,摇蚊和杂联大蚊三个种属;虻虫属于麻虻属;蜱虫属于草原革蜱1种,且均与形态学鉴定结果相吻合。采用Taqman实时荧光定量PCR方法检测病原体结果显示,在抽取的蚊虫c DNA样品中检测到乙型脑炎病毒特异性基因,检出的阳性率为4.4%;而在蜱虫DNA样品中未检测出马巴贝斯虫特异性基因。结论:经过昆虫种型鉴定试验发现,在内蒙古伊金霍洛地区蚊虫种类主要有:摇蚊,凶小库蚊和杂联大蚊;虻为麻虻属;蜱虫主要种为草原革蜱。通过Taqman实时荧光定量PCR方法检测,该地区部分蚊虫体内携带乙型脑炎病毒,其基因型为Ⅲ型,但是在蜱虫中均未检测到马巴贝斯虫特异性基因。
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