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背景缺血性脑血管病是一类以脑组织缺血性损伤为主要临床表现的疾病,其致残率和病死率较高,是威胁人类健康的主要疾病之一。而动脉粥样硬化(AS)是缺血性脑卒中的主要原因,斑块的形成使血管狭窄或闭塞,斑块脱落是动脉粥样硬化的主要病理改变。动脉粥样硬化的发病机制非常复杂。目前认为,动脉粥样硬化的病理学特征主要为:血管内膜损伤后脂质浸润、单核巨噬细胞、平滑肌细胞增生和泡沫细胞形成。临床上最常用的治疗动脉粥样硬化斑块的药物为他汀类药物,但他汀类药物对斑块治疗效果存在争议,尚有患者不能耐受。因此开发新的治疗动脉粥样的硬化药物和方法也是当前的研究热点。限时喂养(TRF)是间歇性禁食(IF)的一种,较传统的热量限制而言,具有更好的接受性。TRF对啮齿动物和人类的大多数研究都集中在减少高脂饮食引起的肥胖症和相关的代谢性疾病方面。而动物实验的一些初步结果表明,TRF可以延缓神经退行性疾病的发展,改善认知功能;也有可能减轻缺血性脑卒中小鼠的炎性反应,从而起到神经保护作用。但是,TRF对于动脉粥样硬化的作用报道较少,本研究将从基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型的相关炎性因子入手,探讨TRF对动脉粥样硬化的作用机理。目的通过建立ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型,检测限时喂养干预后小鼠主动脉血管病变情况及炎症相关因子的变化,探讨限时喂养对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响,从而为动脉粥样硬化的治疗提供理论依据。方法1.采用SPF级的6-7周龄的雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠共70只,适应性喂养1周后,给予高脂饲料喂养12周,然后随机抽取6只处死进行主动脉组织HE染色检测示主动脉根部出现动脉粥样硬化斑块,成功构建AS小鼠模型。2.分组将剩余的64只AS小鼠随机分为实验组即限时喂养组(TRF组)和对照组即随意进食组(ad libitum,AL组),每组各32只,TRF组每天进食8小时普通饲料,禁食16小时,水自由摄取;AL组每天24小时随意进食普通饲料,水自由摄取。分组喂养28天。3.在分组喂养的第0天、第7天、第14天、第21天、第28天的早上8:00,分别随机选取TRF组和AL组中的各8只AS小鼠测量体重、血糖、血酮的情况,采用剪尾法取血,血糖血酮体测试仪测定血糖、血酮水平,并予以记录。4.在分组喂养28天后用眼球摘除取血法从眶后静脉丛取血,离心后取血清,酶标仪比色法测定小鼠血清中总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)变化。5.在分组喂养28天后HE染色观察主动脉根部的斑块病理变化、病变程度和斑块面积变化。6.在分组喂养第3天、第7天、第14天、第28天的早上8:00随机选取TRF组和AL组中的各8只AS小鼠,用眼球摘除取血法从眶后静脉丛取血后处死,离心后取血清,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。7.在分组喂养28天后免疫组化检测主动脉根部组织中核因子-κB(NF-κB)的阳性细胞表达量。结果1.雄性ApoE基因敲除小鼠高脂饲料喂养12周后,小鼠主动脉根部形成明显的AS斑块。2.限时喂养以后,TRF组的小鼠体重稍低于AL组,但两组小鼠体重差异无统计学意义(P>0.05),提示限时饮食对ApoE-/-小鼠体重无明显影响。3.TRF组小鼠的血糖较AL组降低,差异有统计学意义(P<0.01)。4.TRF组小鼠的血酮体较AL组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。5.分组喂养4周后,与AL组相比,TRF组血清TC、LDL-C水平下降,差异有统计学意义(P<0.05)。6.分组喂养4周后,与AL组相比,TRF组小鼠主动脉根部的斑块面积减少,斑块中脂质沉积、胆固醇结晶、泡沫细胞均减少,差异有统计学意义(P<0.05)。7.分组喂养第3天、第7天,两组小鼠血清中的IL-10无明显差异(p>0.05),而分组喂养第14天、第28天,TRF组的IL-10较AL组升高,差异有统计学意义(p<0.05)。TRF组的TNF-α在实验第3天、第7天、第14天、第28天较AL组均降低,差异有统计学意义(p<0.05)。8.分组喂养4周后,与AL组相比,TRF组主动脉根部AS斑块NF-κB p65的阳性表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.限时喂养可以减少AS小鼠模型中的主动脉斑块面积,降低血糖水平,升高血酮体水平,减轻血清中的TC、LDL-C水平。2.限时喂养可以减少AS小鼠模型中炎症相关因子NF-κB、TNF-α的水平,增加IL-10的水平,提示限时喂养可能通过抑制NF-κB信号通路延缓动脉粥样硬化的病变进展。