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目的：bcl-2是调控细胞凋亡的重要基因，它编码的蛋白通过阻止细胞凋亡而延长细胞存活。高达90％的肺癌组织和细胞株高表达bcl-2。细胞因子IL-6是一种重要的正性细胞调控因子，它通过与IL-6R结合发挥其生物学作用，目前的研究表明IL-6高表达与肺癌的发生、发展和转移密切相关。反义技术因其高效、特异和简便的特点，正逐渐成为人们研究肿瘤发病机制和基因治疗肿瘤的重要手段。本文应用bcl-2硫代磷酸寡脱氧核糖核苷酸(简写为bcl-2 AS-PS-ODN，下类同)、IL-6 AS-PS-ODN、IL-6R AS-PS-ODN三种反义寡核苷酸，研究它们分别单独作用以及bcl-2 AS-PS-ODN与IL-6 AS-PS-ODN联合作用对小细胞肺癌细胞株NCI-H446增殖和凋亡的影响，检测bcl-2、IL-6、IL-6R、Mcl-1等基因mRNA表达水平的变化，探讨三种AS-PS-ODN对NCI-H446细胞生长的影响及其调控机制，了解反义药物联合作用的效果。 方法：通过MTT实验、细胞克隆形成实验观察各组反义药物对细胞增殖的影响，应用细胞凋亡线粒体流式检测和DNA倍体分析观察各组药物对细胞凋亡的影响，建立半定量RT-PCR，检测各组药物作用后的NCI-H446细胞株bcl-2、IL-6、IL-6R、Mcl-1等相关基因mRNA表达水平的变化。 结果：1、各组反义寡核苷酸均能抑制NCI-H446细胞增殖和细胞克隆的形成，5μmol／L AS-PS-ODN作用48小时后，细胞增殖抑制率分别为：bcl-2 AS-PS-ODN 15.46％，IL-6 AS-PS-ODN 22.79％，IL-6R AS-PS-ODN 19.85％，bcl-2 AS-PS-ODN与IL-6 AS-PS-ODN联合作用组41.91％，与空白对照组及正义或无义对照组比较均有显著性差别(P＜0.05)。AS-PS-ODN作用7天后，细胞克隆形成率分别为：10μmol／L bcl-2 AS-PS-ODN 13.25％，5μmol／L IL-6 AS-PS-ODN 7.00％，10μmol／L bcl-2 AS-PS-ODN与5μmol／L IL-6 AS-PS-ODN联合作用组1.63％，10μmol／L IL-6RAS一PS一ODN 11 .88%，与空白对照组及正义或无义对照组比较均有显著性差别(尸<0.01)。各组反义寡核普酸均能诱导细胞凋亡，细胞凋亡线粒体流式检测结果显示:单药作用的凋亡率均在32.0%以下，而bel一2 AS一PS一ODN与IL一6 AS一PS一ODN联合作用时则达到64.7%，与空白对照组及正义或无义对照组比较均有显著性差别(尸<0.01)。DNA倍体分析显示:单药作用的凋亡率均在23.5%以下，而bel一2AS一PS一ODN与lL一6 AS一PS一ODN联合作用时则达到36.4% 2、半定量Rl’- PCR检测发现bel一2、IL一6、IL一6R和Mel一l四种基因在小细胞肺癌细胞株NCI一H446中均有比较高的表达，三种AS一PS一ODN作用后都能显著下调自身基因的表达，bcl一2 AS一PS一ODN能使自身基因表达下调62.58%、IL一6AS一PS一ODN能使自身基因表达下调84.07%、IL一6R AS一PS一ODN能使自身基因表达下调60.31%。bcl一2 AS一PS一ODN和IL一6 AS一PS一ODN作用细胞后除了能下调自身基因表达外，还伴有其它基因表达的改变，bel一ZAS一PS一ODN作用后IL一6表达上调74.3%，IL一6 AS一PS一ODN作用后有bc卜2表达下调32.2%和IL一6R表达上调65.8%，而IL一6R AS一PS一ODN作用后其它基因的改变很小。三种反义寡核昔酸作用后，Mcl一1基因表达的变化都不明显。 结论1、bcl一2 AS一PS一ODN和IL一6 AS一PS一ODN通过下调抗凋亡基因的表达来 诱导凋亡、抑制细胞增殖。 2、AS一PS一ODN联合作用效果较单独作用更佳。 3、IL一6与bcl一2处于同一调控链上，IL一6属上游调控基因，能够调控bcl一2 的表达，同时bel一2亦能通过负反馈调控IL一6的表达。