TCP1对卵巢癌增殖、侵袭能力及预后的影响

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目的:探讨分子伴侣蛋白TCP1表达量与卵巢癌患者预后的关系,评估TCP1能否成为卵巢癌患者的一种新的预后指标。从细胞水平观察TCP1基因表达差异对肿瘤细胞生物学功能的影响。初步探讨TCP1参与及调控卵巢癌细胞生物学行为的潜在机制,为卵巢癌靶向治疗提供新的思路。方法:1、收集经病理诊断确诊的正常卵巢、卵巢囊腺瘤、卵巢交界性肿瘤以及上皮性卵巢癌的组织标本。通过免疫组化(IHC)检测TCP1蛋白在这四种卵巢组织中的表达情况。2、运用Image-pro plus计算每张组织切片的TCP1表达量(IOD/area),SPSS20.0分析四种卵巢组织TCP1的表达量的差异性。将卵巢癌患者分别根据年龄、肿瘤分化程度及FIGO分期等指标重新分组,分析不同组间TCP1表达量的差异性。3、Kaplan-Meier plotter在线数据库中,使用TCP1探针(Affymetrix ID:222010_at)分析上皮性卵巢癌TCP1表达情况与总体生存时间(OS)和无瘤生存时间(PFS)的相关性。4、Western blot检测IOSE-80(正常卵巢上皮细胞)、SKOV3及A2780(卵巢上皮癌细胞)三种细胞TCP1蛋白的表达情况。5、利用shTCP1慢病毒感染TCP1高表达的A2780细胞,构建稳定的TCP1敲减细胞株A2780/TCP1-KD。同时利用空载慢病毒构建阴性对照细胞A2780/TCP1-NC。6、采用MTT法、菌落形成法、创面愈合法和Transwell法检测A2780/TCP1-NC和A2780/TCP1-KD细胞的增殖、迁移和侵袭能力。7、Western Blot检测A2780/TCP1-NC和A2780/TCP1-KD两组细胞的PI3K/Akt/mTOR通路中关键调控因子蛋白表达情况。结果:1、四种卵巢组织中TCP1表达量存在差异,卵巢交界性肿瘤以及卵巢上皮细胞癌的TCP1表达量均高于正常卵巢和卵巢囊腺瘤组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。2、卵巢癌患者病理组织中TCP1的表达量与肿瘤分化程度呈负相关;与FIGO分期呈正相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。3、通过Kaplan-Meier plotter在线数据库,发现TCP1表达情况与卵巢癌患者的预后呈负相关。4、Western Blot条带显示TCP1蛋白在A2780细胞中的表达量高于IOSE-80。5、Western Blot验证通过慢病毒感染A2780细胞,成功构建TCP1敲减的稳转株A2780/TCP1-KD细胞及阴性对照细胞株A2780/TCP1-NC。6、A2780细胞的增殖数量、迁移速度和侵袭能力在敲减分子伴侣蛋白TCP1后明显下降。7、Western Blot结果表明,在A2780细胞中,TCP1敲减可下调PI3K/Akt/mTOR通路中p-Akt和p-mTOR的表达。结论:1、TCP1蛋白水平在侵袭性上皮性卵巢癌中过表达,并且与患者预后不良相关。因此TCP1可作为一种评估卵巢癌患者生存预后的一个指标。2、高表达TCP1与卵巢癌细胞的增殖、迁移、侵袭有关。TCP1上调促进肿瘤进展的机制可能与PI3K信号通路激活有关,TCP1可能成为卵巢癌治疗的新靶点。
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