血栓调节蛋白N端结构域抗炎作用的初步研究

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目的:血栓调节蛋白(TM)主要由血管内皮细胞分泌,通过结合HMGB1,激活蛋白C,降低凝血酶的活性而发挥抗炎、抗凝的活性。TM有三个结构域:EGF样结构域——通过促进蛋白C的形成,发挥抗凝的作用,另外两个结构域糖基化氧结构域、N端样结构域(TM-N)功能尚不明确,本文对其结构域之一TM-N行基础性研究,设置TM-N参与不同的炎症反应,了解TM-N在不同炎症反应中所起的作用及作用机制。方法:1.LPS及HMGB1+LPS刺激RAW264.7细胞,分别加入TM-N共培养2.免疫荧光检测0h、2h时核因子NF-κB被激活的量3.RT-PCR检测0h、3h、6h时IL-6mRNA表达的量的变化4.ELISA测定0h、1.5h、4h、8h.时细胞上清液中TNF-α, IL-1分泌的量结果:1.HMGB1+LPS刺激组同LPS刺激组相比较,HMGB1+LPS组6h时IL-6mRNA表达(2.637±1.073)明显高于LPS组(0.376±0.156);该组8hTNF-α(916.52±38.31)及IL-1(1396.47±135.08)均高于LPS组(分别是490.60±87.70和751.36±161.42,P值均<0.05)。2.LPS+HMGB1+TM-N组与LPS+HMGB1组相比较,二组在8h TNF-α检测值分别为307.21±39.98和916.52±38.31,IL-1分别为490.12±62.79和1396.47±135.08,在6h时IL-6mRNA检测值分别为0.318±0.216和2.637±1.073,前者均小于后者(P<0.05~0.01),且在2h时TM-N对LPS+HMGB1组NF-κB表达的抑制率达到81%(P<0.05)。3.LPS+TM-N组同LPS组相比,二者8h TNF-α检测值分别为269.59±34.27和490.60±87.70,IL-1分别为427.37±108.68和751.36±161.42,6h时IL-6mRNA分别为0.265±0.115和1.275±0.156,LPS+TM-N组均低于LPS组(P<0.05~0.01)。2h时TM-N对LPS组NF-κB表达的抑制率达到70%(P<0.05)。结论:1.HMGB1可以放大LPS诱发的炎症反应2.TM-N可以抑制LPS诱发的炎症反应以及HMGB1的促炎作用。
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