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本试验采用体外培养法，研究维生素B12(VB12)和钴对瘤胃产气参数、瘤胃发酵、微生物酶活力影响;利用绝对定量PCR技术分析检测瘤胃微生物主要菌群的数量变化;并进一步以高通量测序分析技术，研究瘤胃微生物种群多样性的变化，初步探讨钴和VB12影响瘤胃发酵的机理。
试验一不同精粗比水平下维生素B12对体外瘤胃发酵的影响通过体外培养法，研究不同的精粗比条件下添加VB12对体外瘤胃发酵和微生物酶活力的影响。体外试验瘤胃液取自3只安装永久性瘤胃瘘管的湖羊。试验采用3×3双因子试验设计，即3种精粗比底物(玉米∶羊草=35∶65、50∶50、65∶35)和3种VB12的添加量（0、40和90 ng/mL）。结果显示:1）随着底物精粗比和VB12添加量的提高，体外发酵24h的产气量、潜在产气量和有机物消化率极显著地增加(P＜0.01);2）精粗比和VB12显著影响瘤胃发酵参数，当精粗比为50∶50和65∶35时，VB12显著提高发酵液氨态氮浓度、微生物蛋白产量、总挥发酸和乙酸、丙酸浓度（P＜0.05），但对丁酸浓度和乙酸丙酸比没有显著影响（P＞0.05）;3）当底物精粗比为35∶65和50∶50时，VB12添加量为40和90 ng/mL时，24 h发酵液中羧甲基纤维素酶活、木聚糖酶活和淀粉酶活力显著高于对照组（P＜0.05）;当精粗比为65∶35时，微生物酶的活力在90 ng/mL添加量时显著提高(P＜0.05)。结果提示，底物的精粗比和VB12显著地影响体外瘤胃发酵，VB12的添加量具有线性效应，当底物精粗比为35∶65时，添加VB12对瘤胃发酵的效果不显著;当底物精粗比为50∶50和65∶35时，添加VB1240ng/mL即能够促进瘤胃的发酵，即VB12在较高的精粗比底物中具有较好的添加效果。
试验二不同钴水平下维生素B12对体外瘤胃发酵和微生物生态的影响通过体外培养法，探讨钴(Co)和VB12对瘤胃发酵、微生物酶活力和和瘤胃微生态的影响。体外试验瘤胃液取自3只安装永久性瘤胃瘘管的瘘管牛。试验采用2×2双因子试验设计，即2种Co的添加水平（0和163.5 ng/mL）和2种VB12的添加水平（0和40 ng/mL）。结果显示:1）添加Co和VB12均显著增加了体外发酵24 h的产气量和有机物消化率（P＜0.05），VB12对24 h潜在产气量有增加的趋势（P＜0.1），但是二者对产气速率没有显著影响（P＞0.05）;2）添加Co和VB12显著提高发酵液中总挥发酸的产量(P＜0.05)，但是二者对丁酸浓度和乙酸丙酸比没有显著作用(P＞0.05)，VB12的添加极显著地增加乙酸、丙酸和微生物蛋白的产量（P＜0.01），而Co的添加极显著地提高了氨态氮浓度(P＜0.01);3) VB12的添加显著提高羧甲基纤维素酶和淀粉酶的活力（P＜0.05）;与不添加组相比，VB12处理组的木聚糖酶活力提高77.4％（0.05＜P＜0.1）;与Co处理组相比，Co-VB12处理组的木聚糖酶活力提高70.3％（0.05＜P＜0.1）;4）Co和VB12的添加改变了瘤胃微生物的多样性，不添加组、Co处理组、VB12处理组和Co-VB12处理组的OTU个数（序列相似度＞97％）分别为2046、1967、1815和2536，表明Co和VB12联合添加能够丰富菌群的多样性;Co处理组、VB12处理组和联合添加组的琥珀酸单胞菌属(Succinimonas)、琥珀酸弧菌属(Succinivibrio)、月形单胞菌属(Selenomonas)和巨型球菌属(Megasphaera)的丰度较不添加组降低，当Co和VB12联合添加时，醋酸菌属(Acetobacter)和乳酸菌属Lactobacillus拘丰度大大增加;5）随着Co和VB12的添加，瘤胃微生物的数量发生显著变化（P＜0.05），VB12的添加显著增加了总菌、白色瘤胃球菌(Ruminococcus albus)、黄色瘤胃球菌(Ruminococcus flavefaciens)、产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes)、嗜淀粉瘤胃杆菌(Ruminobacter amylophilus)、栖瘤胃普雷沃氏菌(Prevotella ruminicola)和痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)的数量（P＜0.05），而Co的添加显著增加了溶淀粉琥珀酸单胞菌(Succnimonasamylolytica)和溶糊精琥珀酸弧菌(Succinivibrio dextinosolvens)的数量(P＜0.05)，并且Co和VB12对溶淀粉琥珀酸单胞菌数量的影响具有交互作用（P＜0.05）。
结果表明，当满足反刍动物Co的添加量时，仍有必要再添加VB12，Co和VB12通过改变瘤胃微生物的多样性、促进瘤胃中主要纤维降解菌、半纤维素降解菌、淀粉降解菌和乳酸利用菌的生长，可提高微生物酶活力，促进瘤胃发酵。