植物光小体组装和光小体新成员BBX28在光周期开花通路中的功能研究

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光是植物生长和发育的重要环境因子之一。植物感知光后光受体及不同蛋白会在分子水平和细胞水平被调节从而影响光响应基因的表达。光信号中很多组份在细胞核内形成显微镜明显可见的光小体(photobodies),但对于光小体的起始形成机制不清楚。我们设计了基于核仁marker蛋白nucleolin2(Nuc2)将融合蛋白锚定在细胞核仁处的核仁牵拉系统(NoTS)来研究光小体形成的分子细胞生物学过程。我们发现光小体的不同组份在核仁周边可形成光小体类似结构并且其中含有光小体中的其他组份,提示光小体是通过自我组装方式起始形成的。开花是受光信号调控的一个重要生物学过程,是植物从营养生长向生殖生长转换的一个关键点,影响了植物的生长发育和作物产量。植物调控开花的途径主要有春化途径、自主途径、光周期途径、赤霉素途径和年龄途径。B-box蛋白是一类N端含有一个或两个B-box结构域,C端可能含有CCT(CO,CO-like and TOC1)结构域的锌指类转录因子。CONSTANS(CO)是B-box家族的第一个成员(BBX1),CO结合花原基基因FLOWERING LOCUS T(FT)启动子的CORE1和CORE2元件激活FT的表达。在叶片维管组织中合成的FT蛋白移动到茎顶端分生组织与bZIP转录因子FD相互作用促进MADS box转录因子SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CONSTANS(SOC1)的表达,引起茎顶端分生组织转变为花絮分生组织形成花原基。CONSTITUTIVE PHOTOMORPHOGENIC1(COP1)是一个E3泛素连接酶,与CO相互作用介导CO在黑暗下的泛素化降解。通过光信号通路中的核心分子开关COP1酵母双杂交筛选,我们获得了一个属于B-box家族第五类成员的新互作蛋白BBX28。关于B-box家族第五类成员功能至今知之甚少。我们发现BBX28是光周期开花通路中的负调节子,长日照下过表达BBX28植物明显晚花,FT和SOC1的表达量明显降低。在BBX28N端含有多个保守的半胱氨酸,介导了BBX28的多聚化而加强了BBX28C端与COP1的相互作用。N端半胱氨酸突变会解除BBX28对CO功能的抑制作用,引起FT基因的表达升高。我们还发现BBX28存在磷酸化修饰,发生在其C端,C端磷酸化修饰突变会明显抑制CO对FT的转录激活,而且BBX28的C端含有转录抑制活性。此外,不同光受体突变后BBX28在转录水平和翻译后水平的含量都会减少,光信号促进了BBX28的转录和蛋白累积。因此BBX28通过其N端和C端与CO共同协作,精确地调节了FT的表达,参与植物光周期开花的调控。
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