第一部分紫外线照射及过氧化氢对翼状胬肉成纤维细胞TNF–α分泌的影响目的:本实验通过研究体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞分别在紫外线照射与过氧化氢(150μmol/L)作用下TNF–α的分泌,以期在实验中用过氧化氢模拟紫外线照射,为实验提供准确、方便、快捷的方法。方法:将从临床上收集的人眼翼状胬肉组织剪碎后进行体外贴壁细胞常规培养,取第三到五代细胞做实验。(1)SP法染色鉴定人翼状胬肉成纤维细胞并分成三组:A组为阴性对照组,B组为暴露于波长为290～320nm紫外线组,C组为过氧化氢( 150μmol/L)处理组。(2)将各组分别作用15分钟、30分钟、60分钟、6小时、24小时,提取上清液并离心,ELISA法检测上清液中TNF–α的含量。结果:紫外线照射与过氧化氢均能明显刺激翼状胬肉成纤维细胞TNF–α的分泌,与对照组相比差别有显著性(P <0.05),两组间相比差别无显著性(P >0.05)。结论:过氧化氢(150μmol/L)可用来模拟紫外线照射对人翼状胬肉成纤维细胞的作用。第二部分抑肽酶对翼状胬肉成纤维细胞TNF–α分泌的抑制作用目的:由第一部分的实验可知,紫外线照射与过氧化氢均能刺激翼状胬肉成纤维细胞TNF–α分泌,现采用过氧化氢来模拟紫外线照射,并探讨在体外抑肽酶对翼状胬肉成纤维细胞存活率及分泌TNF–α的影响。方法:同第一部分对翼状胬肉成纤维细胞原代、传代培养,并用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度抑肽酶对细胞存活率的影响。最后再应用ELISA法检测不同浓度的抑肽酶处理24小时后上清液中TNF–α的含量。结果: MTT法检测可知抑肽酶在不同浓度(1500 U/ml、3000 U/ml、6000 U/ml、12000 U/ml)均无刺激人翼状胬肉成纤维细胞增殖作用。ELISA法显示抑肽酶浓度为1500U/ml,3000U/ml时均能明显抑制翼状胬肉成纤维细胞分泌TNF–α,抑制量分别为19.36 pg/ml、38.46 pg/ml、56.15 pg/ml、13.84 pg/ml;10.2 pg/ml、31.46 pg/ml、49.15 pg/ml、4.62pg/ml(P <0.05);且在该浓度时MTT法显示抑肽酶对细胞无促进增殖作用。结论:抑肽酶在一定浓度范围内可有效地抑制翼状胬肉成纤维细胞TNF–α的分泌且无促进增殖作用。