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本文从中医经典古籍入手,对历代医书及当代医家有关肝癌的文献进行了整理研究,从病名沿革、病因病机等方面梳理其学术发展脉络,并重点阐述了柴胡注射液与肝癌治疗之间的关系,提出了柴胡注射液能抑制人肝癌细胞的增殖及促进其凋亡的观点。目的:本实验采用柴胡注射液作用于体外培养的人肝癌细胞株HepG2,抑制其增殖,诱导细胞凋亡,并从分子水平探讨其发生的可能机制。方法:1柴胡注射液抑制人肝癌细胞株HepG2增殖的实验研究。1.1空白对照组(含10%小牛血清的1640培养液)和氟尿嘧啶阳性对照组(血峰浓度10μg/L),及柴胡注射液3mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、25mg/ml、50mg/ml不同浓度实验组。1.2噻唑蓝比色法(MTT)检验人肝癌细胞株HepG2对柴胡注射液的药物及对氟尿嘧啶注射液敏感性。1.3应用流式细胞术(FCM)检测人肝癌细胞株HepG2周期的改变。2柴胡注射液诱导HepG2细胞凋亡研究。2.1应用倒置显微镜、荧光显微镜观察细胞凋亡形态的改变。2.2应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。2.3一步法TUNEL检测细胞凋亡率。结果:1柴胡注射液对HepG2的生长有明显的抑制作用,并诱导细胞发生凋亡,MTT检测表明柴胡注射液对人肝癌细胞的增殖有剂量——效应关系,随浓度的升高,抑制率增高,其半数抑制浓度为(IC50)约为50mg/ml。柴胡注射液微剂量(3mg/ml)与空白对照组之间无显著性差异,柴胡注射液25mg/ml组与阳性对照组氟尿嘧啶组之间无显著性差异,其他各组之间进行两两比较,均有显著性差异。根据流式细胞仪检测结果提示,当浓度为5mg/ml、10mg/ml、25mg/ml柴胡注射液作用人肝癌细胞株HepG2 12小时后,G1期的细胞的百分比不断减少,柴胡注射液为5mg/ml、10mg/ml、25mg/ml时,G1%分别为66.30%,57.27%,49.23%。可见柴胡注射液对人肝癌细胞株HepG2的阻滞主要在G1期。2柴胡注射液对体外肝癌细胞株HepG2凋亡的影响2.1加入柴胡注射液12h后,与空白对照组相比,HepG2细胞形态发生显著变化,倒置显微镜下观察发现细胞体积缩小,变圆,胞浆量减少,并随着药物浓度增加,贴壁细胞逐渐减少,悬浮细胞增多;而当柴胡注射液实验组浓度达到25mg/ml时,其作用效果与氟尿嘧啶阳性对照组几乎相同。2.2经柴胡注射液作用后的HepG2细胞,流式细胞直方图上均可见亚二倍体峰,且凋亡率随用药浓度的增大而增大,呈剂量依赖性。2.3一步法TUNEL检测时,柴胡注射液作用12h后,细胞凋亡率均明显高于空白对照组。结论1柴胡注射液可抑制HepG2细胞的增殖,使细胞阻滞在G1期。2柴胡注射液可诱导HepG2细胞凋亡,并出现凋亡所特有的形态学及生化改变。3柴胡注射液中的有效成分可能是治疗肝癌潜在的药物。