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背景:口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）是世界上第六大常见恶性肿瘤,主要发生在舌、颊、牙龈等部位。尽管目前治疗OSCC的手术、放化疗技术都在不断进步,但中晚期患者5年生存率仍然不到50%。其原因在于OSCC患者早期就诊率低且具有高转移性和高复发率,导致部分患者错过最佳手术时机,只能采取综合治疗,但治疗效果不佳。目前靶向药物由于靶点精确,机制明确,对控制目标人群的疾病进展具有较好的效果,也成为了OSCC的研究热点。OSCC靶蛋白的确定是其靶向药物治疗迫切需要解决的问题。纤调蛋白（fibromodμlin,FMOD）是一种细胞外基质中重要的、富含亮氨酸的小分子蛋白多糖,在肌肉、上皮、骨组织的发育和修复过程中起着重要的调节作用。随着有关FMOD的研究成果被大量发表,研究人员逐渐发现FMOD也是肿瘤微环境的重要组成部分,在前列腺癌、结肠癌、乳腺癌、小细胞肺癌等多种癌症组织内异常高表达,在癌症发生进展中具有重要作用,影响许多关键的生物学过程,如肿瘤细胞的增殖、迁移、凋亡和血管生成。有报道称FMOD在头颈部鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma of the head and neck,HNSCC）中特异性高表达且与患者的生存相关,OSCC在其中约占50%,但未见针对性研究报道。我们用免疫组化（immunohistochemistry,IHC）检测FMOD在不同病理分级OSCC中的表达的预实验结果提示FMOD与OSCC的分化有相关性,因此我们假设:FMOD可能参与了OSCC的发生发展。FMOD在OSCC中的作用及机制需要进一步探讨。目的:本课题旨在研究FMOD在OSCC中的作用及机制,探索OSCC靶向治疗的潜在靶点。方法:1.从湖北医药学院附属太和医院口腔科收集OSCC患者组织标本和正常人口腔组织标本,以及肿瘤患者病理分级的资料,组织标本经固定、包埋和切片处理后采用免疫组化法检测FMOD在组织标本中的表达情况,分析FMOD在正常组织和肿瘤组织中的表达,以及表达水平与患者肿瘤病理分级的相关性。2.收集标本来源的患者的临床资料,统计年龄、性别、吸烟史、饮酒史、肿瘤病理TNM分期等临床特征参数,采用卡方检验分析FMOD的表达水平与OSCC患者临床特征参数的相关性。3.Western Blot法和IF法检测FMOD在正常口腔细胞株HOK-8与OSCC细胞株Cal-27和SCC-15与中的表达情况。4.根据FMOD在OSCC细胞株中的表达情况以及FMOD的m RNA序列,设计并构建靶向FMOD的sh RNA慢病毒载体及包含无序片段的阴性对照慢病毒载体。5.慢病毒感染OSCC细胞系Cal-27细胞和SCC-15细胞,Western Blot法检测被感染的Cal-27细胞和SCC-15细胞的FMOD蛋白表达水平。6.使用RTCA法和EdU试剂盒检测慢病毒感染的细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell小室检测细胞的侵袭能力,分析FMOD对OSCC细胞的生物学功能的影响。Western Blot方法检测经感染的Cal-27细胞和SCC-15细胞内相关生物学功能可能改变的信号通路蛋白的表达水平,研究FMOD在OSCC中的作用机制。7.将感染慢病毒的Cal-27细胞种植在免疫缺陷小鼠（severe combined immunodeficiency mice,SCID mice）左侧背部皮下组织,建立OSCC移植瘤动物模型。定期测量移植瘤大小,监测移植瘤体积的变化。分析在体内水平FMOD对OSCC肿瘤生长的影响。取下移植瘤制成石蜡切片,免疫组织化学法检测相关生物学功能改变的信号通路蛋白的表达水平,研究FMOD在OSCC中的作用机制。结果:1.收集77例病理口腔鳞状细胞癌癌组织及10例正常口腔组织,免疫组化结果显示FMOD在正常口腔组织中阴性表达,在OSCC组织中均阳性表达,且FMOD的表达水平与OSCC患者肿瘤病理分级无关（P＞0.05）。2.统计77例OSCC患者的临床病历资料,年龄、性别、吸烟史、饮酒史、肿瘤病理TNM分期等临床特征参数资料齐全。统计分析结果显示FMOD表达水平与性别、年龄、吸烟史、饮酒史无关（P＞0.05）,与病理TNM分期和N分期显著相关（P＜0.05、P＜0.01）。3.WB和IF实验结果显示FMOD在正常口腔细胞株HOK-8中较低表达,在OSCC细胞株Cal-27和SCC-15中显著高表达4.构建靶向沉默FMOD的sh RNA慢病毒载体,测序结果表明LV10N（U6/m Cherry＆Puro）构建正确,内有靶向FMOD的sh RNA基因目的序列。5.嘌呤霉素成功筛选出慢病毒感染的细胞并自发红色荧光。Western Blot结果显示感染sh FMOD的Cal-27细胞和SCC-15细胞的FMOD表达含量低于对照组（P＜0.05）。6.RTCA和Ed U实验结果显示感染sh FMOD的Cal-27细胞和SCC-15细胞的增殖能力被显著抑制（P＜0.01,P＜0.001;P＜0.001,P＜0.001）。细胞划痕实验结果显示感染sh FMOD的Cal-27细胞和SCC-15细胞的迁移能力被显著抑制（P＜0.01,P＜0.001）。Transwell侵袭实验结果显示感染sh FMOD的Cal-27细胞和SCC-15细胞的侵袭能力被显著抑制（P＜0.001,P＜0.001）。Western Blot结果显示,靶向敲低FMOD可抑制EGFR、p-AKT、p-ERK的蛋白表达水平（P＜0.001,P＜0.001,P＜0.001）。7.动物实验结果显示,感染shFMOD的Cal-27细胞的移植瘤生长被显著抑制（P＜0.001）。免疫组化结果显示,靶向敲低FMOD表达可抑制EGFR、p-AKT、p-ERK的蛋白表达水平。结论:1.FMOD在OSCC组织和细胞株中高表达,FMOD表达水平与OSCC患者的病理TNM分期和淋巴结转移显著相关,提示FMOD可能参与OSCC的发生发展,有望成为预测OSCC分期及淋巴结转移的潜在生物标志物。2.靶向敲低OSCC细胞中FMOD表达可抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可抑制EGFR、p-AKT和p-ERK的蛋白表达。3.使用FMOD沉默的OSCC细胞株构建OSCC动物移植瘤,肿瘤生长显著受抑制;靶向敲低FMOD可抑制移植瘤中EGFR、p-AKT和p-ERK的蛋白表达,提示FMOD可能是治疗OSCC的潜在靶点。