本研究在本室pp65研究课题的前期工作的基础上，将已构建的原核表达载体pet32a-pp65改良并转化到大肠杆菌DE3-plys株，为提高蛋白的得率，首先在诱导条件上进行了摸索，发现参照NOVAGEN公司推荐的指南基础上作微调后，其表达的蛋白量是原先在DE3菌株表达量的5倍以上。为此，在纯化过程中，我们对包涵体的变性和复性作了大量探讨，最后发现以6M尿素和20mM二硫苏糖醇对包涵体处理后，可以将包涵体得以完全溶解，而蛋白的复性则采用逐步透析复性法，使得目的蛋白成为具有天然构象的可溶性蛋白。利用由于目的蛋白带有His.tag，首先采用亲和层析对其进行纯化处理，为了进一步提高蛋白的纯度，随后又对目的蛋白组分进行了阴离子交换层析处理。随后，用纯化蛋白包被ELISA板，通过间接ELISA法检测70份临床未知血清中抗pp65的IgM抗体。最后，尝试构建pp65的真核表达载体，从pet32a-pp65酶切得到pp65的基因，将之连接到pVAX1载体上，测序结果表明构建成功。将pVAX1-pp65转染到293细胞，免疫荧光分析和免疫印迹分析的结果表明该载体具有在体内表达pp65蛋白的能力，为进一步的研究奠定了基础。