论文部分内容阅读
目的:1.探讨长春新碱(VCR)、顺铂(DDP)、人重组白细胞介素-24(rhIL-24)、槲皮素(Que)单独及联合应用对人结直肠腺癌耐长春新碱HCT-8/V细胞增殖及凋亡的影响。2.探讨VCR、DDP、Que单独及联合应用对HCT-8/V细胞耐药逆转的可能机制,为临床治疗提供实验及理论支撑。方法:1.应用IncuCyte ZOOM实时动态活细胞成像平台培养人结直肠癌HCT-8细胞和耐长春新碱HCT-8/V细胞,筛选合适的细胞密度;2.应用IncuCyte ZOOM动态活细胞成像平台检测VCR、DDP、rhIL-24、Que单独应用,VCR与DDP、Que分别联合应用对HCT-8/V细胞增殖的影响,包括生长规律,不同时间抑制率,不同浓度抑制率;3.应用IncuCyte ZOOM动态活细胞成像平台检测VCR、DDP、Que作用于HCT-8/V细胞后凋亡的动态变化;4.应用蛋白免疫印迹法检测单、双因素作用于HCT-8/V细胞后P-gp、mTOR蛋白表达情况。结果:1.实时动态活细胞成像平台培养HCT-8和HCT-8/V细胞观察细胞增殖速度和生长规律,结果从细胞增殖曲线观察,细胞密度为1×10~3个/ml时,HCT-8细胞培养64 h细胞增殖进入对数生长期,72 h时达到100%融合度;HCT-8/V生长缓慢,72 h时细胞数量仍然增殖。从生长曲线观察,细胞密度为1×10~4个/ml时,HCT-8细胞培养30 h即进入对数生长期,培养45 h时达到100%细胞融合度;HCT-8/V培养63 h进入对数生长期,120 h细胞可以达到55%细胞融合度,延长时间观察144 h达到对数生长期。实验选择1×10~4个/ml种植更适合实时动态观察。2.应用IncuCyte ZOOM动态活细胞成像平台检测VCR、DDP、Que单独及联合应用干预HCT-8/V细胞的增殖,结果VCR、DDP、Que单独及联合应用对HCT-8/V细胞有抑制作用,其抑制率(%)分别为:24.3、31.2、20.7、55.3、45.4,其中联合用药组的抑制率明显高于各单独用药组。联合用药组使细胞抑制率从VCR组的24.3%上升为55.3%和45.4%,使生长抑制逆转了2.28倍和1.89倍。而HCT-8/V细胞经rhIL-24处理后,细胞增殖无明显抑制作用。3.应用IncuCyte ZOOM动态活细胞成像平台检测VCR、DDP、Que单独应用干预HCT-8/V细胞凋亡的影响,结果VCR、DDP单独作用于HCT-8/V细胞,诱导细胞凋亡作用不明显;而Que(200μM)单独作用于HCT-8/V细胞在48 h内存在明显的诱导细胞凋亡作用(p<0.05)。4.应用蛋白免疫印迹法测各组蛋白表达变化,结果Que组降低mTOR蛋白表达水平;VCR+DDP组降低P-gp蛋白表达水平。结论:1.HCT-8细胞和HCT-8/V细胞以密度为1×10~4个/ml种植进行实时动态活细胞成像系统观察,其对数生长期HCT-8细胞为30小时,HCT-8/V细胞为144小时;2.VCR/DDP、VCR/Que联合用药对HCT-8/V细胞增殖抑制作用优于各自单独用药。rhIL-24对HCT-8/V细胞增殖无抑制作用;3.VCR、DDP对HCT-8/V细胞诱导凋亡作用无明显影响,而Que诱导HCT-8/V细胞凋亡;4.抑制P-gp蛋白表达可能是DDP对VCR的增敏机制之一。