核桃楸仁可溶性多糖提取纯化及结构特征初步分析

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本文通过对核桃楸仁可溶性多糖的提取、纯化、分离及结构特征的一系列试验研究得出以下结论:1、对核桃楸仁可溶性多糖进行了热水提取、纤维素酶法提取和微波预处理提取的试验研究。经正交试验得出热水浸提时的最佳工艺条件为:料水比1:35,浸提温度100℃,浸提时间2.5h,多糖的一次提取得率为6.134%;得出纤维素酶法提取的最佳工艺条件为:提取温度60℃,pH值4.5,提取时间2h,加酶量1.0%,在此条件下多糖的一次提取得率为6.781%。微波预处理单因素试验表明,采用微波预处理15min可使多糖一次提取得率提高到6.791%。微波处理促进了大分子量的多糖组分的溶出提高多糖得率,使所提多糖的平均分子量增大。此外实验确定出热水浸提次数以2次较合理,累计提取得率可达6.778%;醇沉工艺条件为以多糖溶液4倍体积的无水乙醇沉淀7h。2、在核桃楸仁可溶性多糖粗粉的纯化试验中,系统地进行了Sevag法、酶法结合Sevag法除蛋白工艺条件的研究。根据试验结果,经综合考虑,先用木瓜蛋白酶以0.2%的加酶量,在pH6.0,温度65℃条件下,进行酶解4h,然后以氯仿-正丁醇4:1,Sevag试剂与多糖溶液体积比为1:2的条件进行一次Sevag法除蛋白,蛋白质去除率达到85.75%,多糖的损失率仅为15.97%。分步醇沉试验中,分别在乙醇浓度为30%、50%和80%得到3个多糖组分,其分子量分别为:(?)N(数均分子量)为22743、28492和39645;(?)W(重均分子量)为25644、37763和48630;(?)Z(Z均分子量)为67157、65203和72464。另外,对除蛋白后的多糖精粉进行了DEAE-52纤维素离子交换柱层析分离,得到蒸馏水洗脱组分PW和0.1mol/LNaCl洗脱组分PS两个主要的多糖组分,经凝胶HPLC标准分子量对照分析,多糖组分PW的(?)N为17735、(?)w为44787、(?)Z为17087,多糖组分PS的(?)N为28259、(?)w为51635、(?)Z为39547;两组分的相对含量比例为25%和75%。3、单组分多糖PW为乳白色粉末状固体,PS为浅褐色粉末状固体,可溶于水,不溶于乙醇、乙醚、丙酮等有机溶剂。多糖组分PW与PS分别经2.0mol/L H2SO4完全水解后HPLC分析单糖组成,确定PW由单一葡萄糖组成;PS由葡萄糖和鼠李糖组成。红外光谱(IR)分析,推断多糖组分PS为a-D-葡萄吡喃糖;多糖组分PW为具有羟基呋喃糖环结构的多糖。
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