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目的:探究中介素(Intermedin,IMD)对大鼠肾小球内皮细胞(rRGEC)缺氧损伤的影响及其可能的机制。方法:(1)实验分组:将rRGEC传代培养,选取生长状态良好的细胞,随机分成正常组(N组),缺氧组(H组)及IMD组,N组置于二氧化碳培养箱内(5%CO2、37℃)培养,H组与IMD组置于三气培养箱内(90%N2、5%CO2、5%O2、37℃)缺氧培养,按培养液中IMD的最终浓度将IMD组分为10-8mol/L(IMD1组)、10-7mol/L(IMD2组)、10-6mol/L(IMD3组)。6h后留取各组细胞及其培养液用于检测。(2)相差显微镜下观察细胞形态学特点。(3)流式细胞术分析细胞凋亡率。(4)Elisa法检测细胞上清液中4-羟壬烯醛(4-HNE)、活性氧(ROS)及超氧化物歧化酶(SOD)含量。(5)tanswell聚碳酸酯膜小室内制备内皮细胞单层,并测其底室与顶室FITC-BSA荧光强度,以底室与顶室荧光强度比值的变化来表示细胞通透性变化。(6)实时定量PCR检测各组细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的相对表达量。(7)免疫细胞化学法检测细胞HIF-1α及VEGF蛋白的表达并进行半定量分析。结果:(1)细胞形态学改变:相差显微镜下,N组细胞生长状态良好,无悬浮死亡细胞;H组细胞肿胀、悬浮死亡细胞较多;与H组相比,IMD1、IMD2、IMD3组细胞损害均减轻,悬浮死亡细胞较少,与N组接近。(2)细胞凋亡率的变化:与N组相比,IMD1、IMD2、IMD3组细胞凋亡率降低(P<0.05);与H组相比,IMD1、IMD2、IMD3组细胞凋亡率均降低(P<0.05)。(3)培养液上清中4-HNE、ROS、SOD的含量:与N组相比,H组细胞培养液上清中4-HNE、ROS升高,SOD降低(P<0.05);与H组相比,IMD1、IMD2、IMD3组细胞培养液上清中4-HNE、ROS降低,SOD升高(P<0.05)。(4)细胞通透性的改变:与N组相比,H组transwell聚碳酸酯膜小室的底室与顶室FITC-BSA荧光强度比值增加,细胞通透性增加(P<0.05);与H组相比,IMD1、IMD2、IMD3组transwell聚碳酸酯膜小室的底室与顶室FITC-BSA荧光强度比值降低,细胞通透性降低(P<0.05)。(5)HIF-1αmRNA及蛋白的相对表达量:与N组相比,H组HIF-1αmRNA及蛋白相对表达量增高(P<0.05);与H组相比,IMD2组HIF-1αmRNA及蛋白相对表达量增高(P<0.05)。(6)VEGFmRNA及蛋白的相对表达量:与N组相比,H组VEGFmRNA及蛋白相对表达量增高(P<0.05);与H组相比,IMD2组VEGFmRNA及蛋白相对表达量增高(P<0.05)。(7)相关分析发现HIF-1αmRNA、VEGFmRNA相对表达量与细胞凋亡率呈较强负相关(r1=-0.919,r2=-0.911,P<0.05)。结论:中介素可使缺氧损伤的细胞形态改善且细胞通透性降低,脂质过氧化物产生减少,细胞凋亡减轻,因此减轻了缺氧损伤,进而保护了肾小球内皮细胞,与其上调HIF-1α与VEGF生成有关。