论文部分内容阅读
玳玳(Citrus aurautium)为芸香科柑橘属酸橙的变种，是原产我国的重要木本香花，其花香气浓郁，可供窨制花茶、香精提取和入药，具有较高的观赏价值和经济价值。
本研究以玳玳花瓣为材料，采用RT-PCR和RACE技术，克隆了玳玳HPL基因cDNA全长，并对其原核表达和基因组进行研究，为下一步利用HPL基因cDNA进行遗传转化研究奠定基础，希望为花卉香味的遗传改良提供一条新途径。主要试验结果如下：
1、采用RT-PCR和RACE技术克隆了玳玳HPL基因cDNA全长
玳玳HPL基因cDNA全长为1776bp，其中包含52bp的5′非编码区，224bp的3′非编码区，1500bp的编码区(编码499个氨基酸，分子量为55.7 kDa)。玳玳HPL基因cDNA编码的氨基酸序列中包含了HPL的四个保守区域。经推断，玳玳HPL为亲水性多肽，将该HPL基因cDNA编码区的核苷酸序列及所推导的氨基酸序列与其它植物HPL基因cDNA进行比较，结果表明，玳玳HPL基因cDNA编码区与芸香科中的甜橙和粗柠檬序列一致性最高，分别达99％和98％，与黄瓜和甜瓜的一致性最低，分别为33.3％和33.2％。将氨基酸序列的分析结果绘成进化树，从进化树可以看出，玳玳花瓣HPL与粗柠檬、甜橙、紫花苜蓿、番茄、马铃薯、甜椒、烟草、番石榴、拟南芥的13-HPL聚成一类。由此，可以推断玳玳花瓣HPL属于13-HPL类。
2、玳玳HPL基因cDNA的原核表达
将分离出来的玳玳HPL基因cDNA的编码区序列插入pET-15b载体上构建原核表达载体，在细菌BL21细胞中进行原核表达，结果表明，该编码区片段可以在原核细胞中大量表达，其表达产物分子量大小约为55 kDa，与理论推算的13-HPL蛋白的分子量55.7 kDa相符。
3、玳玳HPL基因组扩增
通过PCR扩增得到了玳玳HPL基因组序列。测序结果显示玳玳HPL基因中包含一个长2374bp的内含子。