【摘 要】
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啤酒发酵过程中芳香醇的产生途径主要有两个:一个是从头合成途径,另一个是Ehrlich途径。从头合成途径是一条多分支、多种反馈抑制的生物合成途径;因此以这种方式生产芳香醇（2-苯乙醇）的含量是非常低的。同时酵母可以利用芳香族氨基酸作为唯一的氮源,通过Ehrlich途径生产相应的醇类包括2-苯乙醇,这是酿酒酵母中芳香醇合成的主要途径。为了研究关键基因（ARO9和ARO10）的弱化对酵母发酵后生成的芳香
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啤酒发酵过程中芳香醇的产生途径主要有两个:一个是从头合成途径,另一个是Ehrlich途径。从头合成途径是一条多分支、多种反馈抑制的生物合成途径;因此以这种方式生产芳香醇（2-苯乙醇）的含量是非常低的。同时酵母可以利用芳香族氨基酸作为唯一的氮源,通过Ehrlich途径生产相应的醇类包括2-苯乙醇,这是酿酒酵母中芳香醇合成的主要途径。为了研究关键基因（ARO9和ARO10）的弱化对酵母发酵后生成的芳香醇含量的影响,本文以啤酒酵母TTCCC 31194为出发菌株,以p Cas-Lac Z质粒为模板,通过CRISPR/d Cas9基因编辑技术分别设计了酿酒酵母（S.cerevisiae）基因组及真贝酵母（S.eubayanus）基因组的弱化表达菌株。通过测定发酵参数、转录水平以及发酵后生成芳香醇的含量变化,考察了芳香族氨基酸转氨酶Ⅱ和苯丙酮酸脱羧酶的基因弱化对酵母发酵性能的影响。通过研究结果得知,通过艾利希途径,酵母将麦汁中的芳香族氨基酸转化为相应地芳香醇,且芳香醇的生成主要集中在发酵前期。利用RT-q PCR从转录水平的角度,发现在啤酒酵母中Seub ARO10、Seub ARO9的基因表达水平分别比Sc ARO10、Sc ARO9基因的表达水平高。ARO9基因的弱化会提升酵母的生长速度并增强其生长能力;但发酵结束后对酵母芳香醇的终产量没有明显的影响,苯乙醇、酪醇、色醇的含量约为49.78mg/L、41.79mg/L、1.87mg/L。ARO10基因的弱化会在一定程度上提高酵母生长速度,提升酵母的生长能力;与出发菌株相比,ARO10基因弱化都会使芳香醇的含量降低,且Seub ARO10基因弱化的影响力大于Sc ARO10基因,Sc ARO10和Seub ARO10弱化菌株的苯乙醇含量分别降低了13.62%、24.31%;酪醇含量依次降低了19.6%、44.28%;色醇含量分别降低22.14%、33.79%。
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