Rybp基因对秦川牛成肌细胞分化作用的研究

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhengj5817
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随着人们生活水平不断提高,牛肉作为一种高蛋白低胆固醇的健康食品越来越受到人们的青睐,市场牛肉的需求量越来越大,供给不足,牛肉价格持续上涨。如何提高牛肉产量和改善牛肉品质成为广大育种工作者关注的热点,而对肉牛肌肉组织生长发育调控机制的研究将从分子水平揭示影响肉牛产肉性能和牛肉品质形成的机理,为肉牛的分子育种工作奠定基础。Ring和YY1结合蛋白(Ring and YY1 binding protein,Rybp)已在小鼠上被证实对肌生成具有抑制作用,而在牛上还未见相关报道,仍需要进一步研究。本研究以Rybp基因为目标基因,利用实时定量PCR技术,检测了该基因在秦川牛16种组织、5个不同发育阶段肌肉、脂肪组织以及不同分化阶段牛成肌细胞中表达水平,利用腺病毒介导该基因在成肌细胞中过量表达,探究Rybp基因对牛成肌细胞分化的作用,通过转录组测序,筛选和鉴定过量表达Rybp基因后的差异表达基因,初步揭示了Rybp基因在牛成肌细胞分化过程中的功能及其对一些重要的成肌细胞分化相关基因的影响。获得的主要研究结果如下:1.秦川牛Rybp基因表达特性分析结果表明,Rybp基因在成年秦川牛睾丸组织中表达量最高,而在背最长肌、里脊、心脏等组织中的表达量相对较低;随着秦川牛年龄的增加,Rybp基因在肌肉组织中的表达水平逐渐升高,在脂肪组织中的表达水平显著下降;在不同分化阶段成肌细胞中,随着成肌细胞分化进程的推进,Rybp基因表达水平逐渐升高,而当分化减速后,Rybp基因表达水平逐渐降低。2.克隆得到秦川牛Rybp基因的CDS区序列,其长度为687bp,编码229个氨基酸残基,然后成功构建并获得了高滴度牛Rybp基因腺病毒过表达载体,病毒滴度为1×109pfu/mL。3.在牛成肌细胞中过表达Rybp基因,可显著抑制肌管的形成,这种差异从过表达后2d开始出现,到6d达到最显著。将过表达Rybp基因6d后的成肌细胞与对照组细胞进行转录组测序,结果共筛选出1311个差异表达基因,其中有707个基因表达水平上调,604个基因表达水平下调,许多参与肌肉发育相关的功能基因表达水平均下调,且差异表达基因显著富集到32条信号通路,包括Wnt等与肌肉发育相关通路。
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